依賴胰島素的糖尿?。↖DDM）或1型糖尿病是一種自身免疫性疾病，其中胰島素缺乏是胰腺β細胞免疫學破壞的結果。在遺傳上易患IDDM的個體中，對β細胞的免疫攻擊發(fā)生在無癥狀期（1），這被稱為“糖尿病前期"。研究表明，這種糖尿病前期通常在IDDM發(fā)病前幾年開始。在這個階段，許多糖尿病前期個體的血液中可以檢測到針對胰島細胞抗原（ICA）和/或胰島素（IAA）的自身抗體。目前用于測定人血清中IAA的最敏感方法采用放射測定競爭性測定（15）。這個試劑盒是一種用于IAA測定的酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）。它使用簡單，不需要使用放射性材料。IAA旨在用于研究中，用于檢測針對人類胰島素的循環(huán)自身抗體。IAA ELISA檢測人胰島素特異性人IgG的存在。此套件僅供研究使用。不用于診斷程序。

作為ALPCO在中國的區(qū)域總代理，艾美捷科技強烈推薦ALPCO熱銷產(chǎn)品胰島素Auto-Ab (IAA) EIA(96孔)。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

胰島素Auto-Ab (IAA) EIA(96孔)檢測原理：

人胰島素固定在微孔上。將參考、陽性和陰性對照以及稀釋的血清樣本添加到適當?shù)奈⒖字?。血清樣品和對照中的人IgG特異性抗體與微孔上的胰島素分子結合。在洗掉未反應的血清物質后，將酶（堿性磷酸酶）標記的人IgG特異性山羊抗體加入抗原-抗體復合物中。c底洗滌以去除未結合的酶后，加入底物（PNPP）溶液，用分光光度法測量顯色。顏色的強度與樣品中IAA的濃度成正比。提供兩種質量控制（陽性和陰性）來監(jiān)測和驗證檢測結果。

提供的物料：

1. PLA IAA = IAA微孔板條（帶支架），12條

2. CONJ ENZ 6X = IAA-IgG酶結合物（濃縮液），2 x 1.0 mL

3. DIL SPE 5X = IAAy本稀釋液（濃縮液），1 x 25.0 mL

4. CONJ ENZ DIL = 結合物稀釋液，1 x 10.0 mL

5. CTRL REF IAA = IAA參考對照（人血清），1 x 1.5 mL

6. CRTL + IAA = IAA陽性對照（人血清），1 x 1.5 mL

7. CRTL- IAA = IAA陰性對照（人血清），1 x 1.5 mL

8. SUBS PNPP = 底物溶液（PNPP），1 x 15.0 mL

9. BUF WASH 25X = 洗滌緩沖液（濃縮液），1 x 20.0 mL

10. SOLN STP = 終止液（1N氫氧化鈉），1 x 6.0 mL

額外需要但未提供的物料：

1. 蒸餾水或去離子水

2. 吸水紙巾，用于洗滌后吸干條帶，以及在孵育期間覆蓋條帶的Parafilm/塑料薄膜

3. 適合血清稀釋的合適尺寸的玻璃管

4. 微量移液管和一次性吸頭，用于遞送10 ?L, 50 ?L, 100 ?L 和 1000 ?L

5. 微孔板洗滌器或擠壓瓶用于洗滌

6. 用于遞送結合物稀釋液的5 mL移液管

7. 500 mL量筒

8. 具有405 nm吸光度能力的微孔板讀數(shù)器

9. 塑料標簽膠帶，用于在檢測前封貼未使用的孔

樣本收集：

通過靜脈采血5-10 mL，放入凝血（紅色頂部）管中?？梢允褂醚宸蛛x器。通過離心分離血清。血清樣本可以存放在2-8°C。測試樣本中過多的溶血和大x塊或微生物生長的存在可能會干擾測試的性能。如果血清樣本在24小時內(nèi)無法分析，請將其冷凍在-20°C。

試劑準備和儲存：

1. IAA-IgG酶結合物復溶：準確將5 mL的結合物稀釋液轉移到含有IAA-IgG酶結合物（濃縮液）的瓶中。關閉瓶蓋并通過倒置d底混合。始終在2-8°C下儲存稀釋后的結合物。在標簽上記錄復溶日期。這種稀釋后的試劑在復溶后30天內(nèi)有效。兩個結合物（濃縮液）瓶子中的每一個都足夠用于6條測試條。根據(jù)需要復溶。

2. IAA y本稀釋液緩沖液：如果由于在較低溫度如2-8?C下儲存，y本稀釋液濃縮液中出現(xiàn)沉淀，可以通過將小瓶放入37?C水浴中30分鐘來溶解。將全部內(nèi)容物（25 mL）轉移到合適容器中的100 mL蒸餾水/去離子水中。d底混合；將容器標記為IAA y本稀釋液，并在2-8°C下儲存。稀釋后的試劑在小瓶上顯示的有效期前都是穩(wěn)定的。

3. 洗滌溶液：如果由于在較低溫度如2-8°C下儲存，洗滌緩沖液濃縮液中出現(xiàn)結晶，可以通過將小瓶放入37?C水浴或培養(yǎng)箱中30分鐘來溶解。將全部內(nèi)容物轉移到500 mL容器中的480 mL蒸餾水/去離子水中。d底混合；將容器標記為洗滌，并在2-8°C下儲存。稀釋后的試劑在小瓶上顯示的有效期前都是穩(wěn)定的。

4. 血清樣本準備：準確將10 ?L（0.010 mL）的血清樣本轉移到已經(jīng)標記的玻璃管中的1.0 mL工作y本稀釋液中。d底混合。

文獻參考：

1. Eisenbarth, G.S., J. Connelly, and J.S. Soeldner (1987). The natural history of type Idiabetes. Diabet./Metab. Rev., 3:873-891.

2. Hirata, Y., H. Ishizu, N. Ouchi, S. Motomura, M. Abe, Y. Hara, H. Wakasugi, I. Takahashi,H. Sakano, M. Tanaka, H. Kawaao, and T. Kanesaki (1970). Insulin autoimmunity in acase with spontaneous hypoglycemia. Japan J. Diabet., 13:312-319.

3. Goldman, J., D. Baldwin, A.H. Rubenstein, D.D. Klink, W.G. Blackard, L.K. Fisher, T.F.Roe, and J.J. Schnure (1979). Characterization of circulating insulin and proinsulinbinding antibodies in autoimmune hypoglycemia. J. Clin. Invest., 63:1050-1059.

ALPCO產(chǎn)品種類多樣，可測樣品來源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、豬、羊、狗、猴等，涉及神經(jīng)生物學、骨代謝、心血管疾病和氧化應激、細胞因子與信號轉導、糖尿病和肥胖癥、內(nèi)分泌學、甲狀腺功能、腸胃病學、免疫學、生殖激素、抗體和抗原、分子診斷等多個研究領域，尤以糖尿病和肥胖癥研究領域見長。

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