胰島素樣生長因子（IGF）I和II在調(diào)節(jié)許多細(xì)胞類型的增殖、分化和特定功能中起著關(guān)鍵作用（1-3）。IGF-I與生長調(diào)節(jié)素C（Sm-C）相同（4），分子量為7649道爾頓（5）。其主要調(diào)節(jié)因素是生長激素（GH）和營養(yǎng)（6），盡管特定組織中的其產(chǎn)生受到多種營養(yǎng)激素和其他肽類生長因子的影響。IGFs與特定的結(jié)合蛋白（IGFBP）緊密結(jié)合。目前已知有七種IGFBP（7,8,22）。IGF-I測量的一個(gè)主要問題是由于IGFBPs在測定中的干擾。在未處理的血清樣本中直接測定（11）會(huì)給出錯(cuò)誤的值，因?yàn)樵跍y定孵化過程中IGF-I/IGFBP-3復(fù)合物的解離極其緩慢。IGF-I在各種體液和許多細(xì)胞系的條件培養(yǎng)基中含量較低。然而，由于IGFBPs的存在，通常數(shù)量過多，這些樣本中IGF-I的測定尤其困難。IGFBP-阻斷的IGF-I ELISA避免了這些問題，允許在眾多樣本中簡單、正確、敏感地測定IGF-I，且時(shí)間花費(fèi)最小。在測量前，采用了各種技術(shù)將IGF-I從其結(jié)合蛋白中物理分離，包括（a）酸性條件下的尺寸排除色譜法，（b）固相萃取，和（c）酸乙醇提?。?,12,13）。然而，這些技術(shù)要么不方便，耗時(shí)，要么給出不完整和不可重復(fù)的回收率。廣泛使用的方法是非乙醇提?。?3,14），由于共沉淀，只能回收70-80%的IGFBP結(jié)合IGF-I。因此，這種提取的絕對結(jié)果是錯(cuò)誤的低值（15）。提取去除IGFBPs不充分，并由于提取過程中樣本的預(yù)稀釋，導(dǎo)致測定靈敏度降低。此外，剩余的IGFBP仍可能在測定中產(chǎn)生干擾。此外，酸乙醇提取在血清或血漿以外的樣本中無效（例如細(xì)胞培養(yǎng)基），在這些樣本中IGF-I的測定已經(jīng)很困難，因?yàn)镮GFBPs經(jīng)常大量存在。為了避免這些挑戰(zhàn)，開發(fā)了一種不要求特殊樣本準(zhǔn)備的簡單測定方法。

一種酶免疫測定法，用于定量測定人血清、血漿和細(xì)胞培養(yǎng)基中IGF-I的水平。僅供研究使用。不用于診斷程序。

作為ALPCO在中國的區(qū)域總代理，艾美捷科技強(qiáng)烈推薦ALPCO熱銷產(chǎn)品Igf-1 elisa, 96孔。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

Igf-1 elisa, 96孔檢測原理：

為了將IGF-I從IGFBPs中解離，樣本必須在酸性緩沖液（樣本緩沖液SB）中稀釋（見圖1）。然后將稀釋后的樣本移入測定孔中。IGF-I抗血清溶解在一個(gè)緩沖液中，該緩沖液中和酸性樣本。在IGF-I抗體溶液中和樣本后，存在的過量IGF-II占據(jù)結(jié)合蛋白的IGF結(jié)合位點(diǎn)，從而允許測定結(jié)果中的游離IGF-I。通過這種方法，IGFBPs并沒有被移除，但是它們的功能，因此它們在測定中的干擾被中和。由于IGF-I抗體與IGF-II的交叉反應(yīng)性極低，過量的IGF-II不會(huì)干擾第一抗體與IGF-I的相互作用。

IGF-I ELISA是一種所謂的夾心測定法，使用兩種特異性高親和力抗體。樣本中的IGF-I與涂覆在微孔板上的第一抗體結(jié)合，然后第二種特異性抗IGF-I抗體轉(zhuǎn)而與固定的IGF-I結(jié)合。第二種抗體是生物s標(biāo)記的。隨后，鏈霉親和素過氧化物酶酶結(jié)合物將與之結(jié)合，在最終的底物孵化步驟中，顏色將根據(jù)樣本中IGF-I的水平定量發(fā)展。IGF-I ELISA的校準(zhǔn)品是由重組IGF-I制備的，濃度分別為2、5、15、30和50 ng/mL。

樣本

1 樣本類型

血清和肝素/EDTA血漿產(chǎn)生可比較的數(shù)值。由于抗凝劑的相對含量高，檸檬酸血漿樣本中的IGF-I水平會(huì)降低。此外，細(xì)胞培養(yǎng)基已被評估并認(rèn)定為合適的樣本類型。IGF-1可能會(huì)有相當(dāng)大的變化，用戶必須確定最佳的稀釋比例。

2 樣本收集

血液樣本采集應(yīng)使用標(biāo)準(zhǔn)靜脈穿刺。應(yīng)避免溶血。

3 所需樣本體積：10 ?L

4 樣本穩(wěn)定性

在緊閉的樣本瓶中：

- 儲(chǔ)存在20-25°C（68-77°F）：最長24小時(shí)

- 儲(chǔ)存在-20°C：最少2年

- 凍融周期最多3次

在-20°C（-4°F）儲(chǔ)存樣本2年以上對讀數(shù)沒有影響。應(yīng)盡量減少樣本的冷凍和解凍。三次凍融周期對樣本沒有影響。

5 干擾

樣本中的甘油三酯、d紅素和血紅蛋白在100 mg/mL、200 ?g/mL和1 mg/mL的濃度下不會(huì)干擾檢測。然而，用戶應(yīng)驗(yàn)證使用溶血、脂血或黃疸樣本。

6 樣本稀釋

- 稀釋：1:21與樣本緩沖液SB

- 在PE/PP管中移液200 ?L樣本緩沖液SB（建議在處理大量樣本時(shí)使用多通道移液器）；加入10 ?L樣本（稀釋1:21）?；旌虾笤跍y定中使用2 x 20 ?L的這種稀釋液。

- 注意：血清和血漿樣本至少必須在樣本緩沖液SB中稀釋1:10，以實(shí)現(xiàn)樣本的充分酸化。

- 根據(jù)預(yù)期的IGF-I值，樣本可以在樣本緩沖液SB中進(jìn)行更高稀釋。

- 樣本稀釋后的穩(wěn)定性：在20-25°C（68-77°F）下最長2小時(shí)。

文獻(xiàn)參考：

1. Baxter RC. 1986 The somatomedins: insulin-like growth factors. Adv Clin Chem.25:49-115

2. Daughaday WH, Rotwein P. 1989 Insulin-like growth factors I and II. Peptide, messenger ribonucleic acid and gene structures, serum, and tissue concentrations. Endocr Rev. 10:68-91

3. Spencer EM (Ed.) 1991 Modern Concepts of Insulin-Like Growth Factors. New York: Elsevier.

4. Klapper DG, Svoboda ME, Van Wyk JJ. 1983 Sequence analysis of somatomedin-C:confirmation of identity with insulin-like growth factor-I. Endocrinology 112:2215-2217. 

ALPCO產(chǎn)品種類多樣，可測樣品來源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、豬、羊、狗、猴等，涉及神經(jīng)生物學(xué)、骨代謝、心血管疾病和氧化應(yīng)激、細(xì)胞因子與信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、糖尿病和肥胖癥、內(nèi)分泌學(xué)、甲狀腺功能、腸胃病學(xué)、免疫學(xué)、生殖激素、抗體和抗原、分子診斷等多個(gè)研究領(lǐng)域，尤以糖尿病和肥胖癥研究領(lǐng)域見長。

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