犬補(bǔ)體因子3（C3）檢測(cè)試劑盒是一種高度敏感的雙位點(diǎn)酶聯(lián)用于測(cè)定狗血漿和血清樣本中C3的免疫測(cè)定法（ELISA）。For僅供研究使用。不用于診斷程序

作為ALPCO在中國(guó)的區(qū)域總代理，艾美捷科技強(qiáng)烈推薦ALPCO熱銷產(chǎn)品補(bǔ)體因子3(犬)ELISA, 96孔。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

補(bǔ)體因子3(犬)ELISA, 96孔檢測(cè)原理：

雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）的原理如圖1所示。在這種測(cè)定中，樣品中的C3與已吸附到聚苯乙烯微孔板表面的抗C3抗體發(fā)生反應(yīng)。通過(guò)洗滌去除未結(jié)合的蛋白質(zhì)后，加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）偶聯(lián)的抗C3抗體。這些酶標(biāo)記的抗體與之前結(jié)合的C3形成復(fù)合物。經(jīng)過(guò)再次洗滌后，通過(guò)添加顯色底物3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺（TMB）來(lái)測(cè)定與免疫吸附劑結(jié)合的酶。結(jié)合的酶量與測(cè)試樣品中C3的濃度成正比；因此，450納米處的吸光度是測(cè)試樣品中C3濃度的量度。測(cè)試樣品中C3的量可以從標(biāo)準(zhǔn)曲線中插值得出，并根據(jù)樣品稀釋進(jìn)行校正。

需要的材料但未提供：

? 精密移液器（2 ?L至200 ?L），用于制備和分發(fā)稀釋液

? 試管

? 微孔板洗滌/抽吸器

? 蒸餾水或去離子水

? 微孔板讀取器（420 nm）

? 制備試劑和緩沖溶液所需的各種玻璃器皿

? 樣品收集用的離心機(jī)

? 血漿收集用的抗凝劑

? 計(jì)時(shí)器

試劑準(zhǔn)備：

使用前將所有試劑置于室溫（16°C至25°C）。

1. 稀釋液濃縮物

提供的稀釋液為5倍濃縮液，必須用蒸餾水或去離子水（1份緩沖液濃縮物，4份dH2O）按1:5稀釋。

2. 洗滌液濃縮物

提供的洗滌液為20倍濃縮液，必須用蒸餾水或去離子水（1份緩沖液濃縮物，19份dH2O）按1:20稀釋。濃縮物在低溫儲(chǔ)存時(shí)出現(xiàn)結(jié)晶并不罕見(jiàn)。稀釋前將濃縮物加熱至30-35°C可以溶解結(jié)晶。

3. 酶標(biāo)記檢測(cè)抗體

計(jì)算每個(gè)微孔板測(cè)試條所需的工作濃縮液量，通過(guò)向每個(gè)測(cè)試條使用的1X稀釋液中添加10 ?L酶標(biāo)記檢測(cè)抗體和990 ?L。使用前立即稀釋，并避免光照。均勻混合，但要輕柔。避免產(chǎn)生泡沫。

4. 抗犬C3 ELISA微孔板

按提供的狀態(tài)使用。打開(kāi)微孔板袋，從袋中取出板。取出在測(cè)定中不會(huì)使用的所有條和孔，放回袋中并重新密封，同時(shí)放回干燥劑。

5. 犬C3校準(zhǔn)物

根據(jù)批次特定的分析證書(shū)進(jìn)行準(zhǔn)備。

樣本收集和處理：

所有血液成分和生物材料應(yīng)視為潛在危險(xiǎn)。處理和處置時(shí)遵循通用預(yù)防措施。

如果血液樣品出現(xiàn)凝塊、嚴(yán)重溶血、脂血或樣品完整性受到質(zhì)疑，請(qǐng)記錄并謹(jǐn)慎解釋結(jié)果。

以下列出的樣品收集和儲(chǔ)存條件僅供參考。樣品穩(wěn)定性尚未評(píng)估。

血清樣品 - 應(yīng)通過(guò)靜脈穿刺收集血液。血凝后通過(guò)離心分離血清。取出血清立即進(jìn)行測(cè)定或分裝后儲(chǔ)存于-80°C（最好）或-20°C。避免反復(fù)凍融。

血漿樣品 - 應(yīng)將血液收集到含有抗凝劑的容器中，然后進(jìn)行離心。立即進(jìn)行測(cè)定或分裝后儲(chǔ)存于-80°C（最好）或-20°C。避免反復(fù)凍融。

已知干擾物質(zhì) - 濃度高于0.1%的疊氮化物和硫柳汞會(huì)抑制酶反應(yīng)。

結(jié)果計(jì)算：

1. 從所有孔的測(cè)試值（吸光度讀數(shù)）中減去平均背景值（標(biāo)準(zhǔn)0的平均吸光度讀數(shù)）。

2. 對(duì)每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的平均重復(fù)讀數(shù)進(jìn)行平均，并使用結(jié)果構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線。通過(guò)使用能夠生成四參數(shù)邏輯曲線擬合的計(jì)算機(jī)軟件來(lái)減少數(shù)據(jù)來(lái)構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線。也可以使用二次多項(xiàng)式（二次）或其他曲線擬合；然而，它們對(duì)數(shù)據(jù)的擬合精度會(huì)較低。

3. 從標(biāo)準(zhǔn)曲線中插值得到測(cè)試樣品值。校正血清稀釋因子，以得出原始樣品中的C3濃度。

ALPCO產(chǎn)品種類多樣，可測(cè)樣品來(lái)源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、豬、羊、狗、猴等，涉及神經(jīng)生物學(xué)、骨代謝、心血管疾病和氧化應(yīng)激、細(xì)胞因子與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、糖尿病和肥胖癥、內(nèi)分泌學(xué)、甲狀腺功能、腸胃病學(xué)、免疫學(xué)、生殖激素、抗體和抗原、分子診斷等多個(gè)研究領(lǐng)域，尤以糖尿病和肥胖癥研究領(lǐng)域見(jiàn)長(zhǎng)。

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