IgG2a檢測試劑盒是一種高靈敏度的雙位點(diǎn)酶聯(lián)免疫測定法（ELISA），用于檢測小鼠血清和血漿樣本中IgG2a的測定。僅供研究使用。不是為了在診斷程序中的使用。

作為ALPCO在中國的區(qū)域總代理，艾美捷科技強(qiáng)烈推薦ALPCO熱銷產(chǎn)品IgG2A(小鼠)ELISA, 96孔。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

IgG2A(小鼠)ELISA, 96孔檢測原理：

雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）的原理在圖1中表示。在這種測定中，樣品中存在的IgG2a與已吸附到聚苯乙烯微孔板表面的抗IgG2a抗體反應(yīng)。通過洗滌去除未結(jié)合的蛋白質(zhì)后，加入與辣根過氧化物酶（HRP）結(jié)合的抗IgG2a抗體。這些酶標(biāo)記的抗體與之前結(jié)合的IgG2a形成復(fù)合物。經(jīng)過另一次洗滌步驟后，通過添加顯色底物3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺（TMB），測定免疫吸附劑上結(jié)合的酶。結(jié)合的酶量與測試樣品中IgG2a的濃度直接相關(guān)；因此，450納米處的吸光度是測試樣品中IgG2a濃度的量度。測試樣品中IgG2a的量可以從標(biāo)準(zhǔn)曲線中插值得出，并根據(jù)樣品稀釋進(jìn)行校正。

未提供的所需材料

? 精密移液器（2微升至1000微升），用于制備和分發(fā)稀釋液

? 試管

? 噴霧瓶或微孔板洗滌器/抽吸器

? 蒸餾水或去離子水

? 微孔板讀取器

? 用于制備試劑和緩沖溶液的各種玻璃器皿

? 樣本收集用的離心機(jī)

? 血漿收集用的抗凝劑

? 計(jì)時(shí)器

樣本收集和處理

所有血液成分和生物材料應(yīng)視為潛在危險(xiǎn)。處理和處置時(shí)遵循通用預(yù)防措施。如果血液樣本出現(xiàn)凝固、嚴(yán)重溶血、脂血，或樣本完整性受到質(zhì)疑，請做記錄并謹(jǐn)慎解釋結(jié)果。

以下列出的樣本收集和儲存條件僅供參考。尚未評估樣本穩(wěn)定性。

? 血清樣本 - 應(yīng)通過靜脈穿刺收集血液。血凝塊形成后通過離心分離血清。取出血清并立即進(jìn)行測定或分裝樣本并儲存于-80°C（最好）或-20°C。避免反復(fù)凍融循環(huán)。

? 血漿樣本 - 應(yīng)將血液收集到含有抗凝劑的容器中，然后進(jìn)行離心。立即進(jìn)行測定或分裝樣本并儲存于-80°C（最好）或-20°C。避免反復(fù)凍融循環(huán)。

? 已知干擾物質(zhì) - 濃度高于0.1%的氮化物和硫柳汞會抑制酶反應(yīng)。

樣本稀釋

測定要求在測試前對每個(gè)測試樣本進(jìn)行稀釋。每次進(jìn)行測定時(shí)，所有樣本都應(yīng)以雙份進(jìn)行測定。推薦的稀釋只是建議。稀釋應(yīng)基于未知樣本的預(yù)期濃度，使稀釋后的樣本落在標(biāo)準(zhǔn)曲線的動態(tài)范圍內(nèi)。如果不確定樣本水平，在運(yùn)行整個(gè)板之前，強(qiáng)烈建議對一個(gè)或兩個(gè)代表性樣本進(jìn)行系列稀釋。

? 血清和血漿樣本 - 推薦的起始稀釋為1:50,000。要準(zhǔn)備1:50,000的樣本稀釋，將5微升的樣本轉(zhuǎn)移到995微升的1倍稀釋液中。這給出1:200的稀釋。接下來，將1:200的樣本通過轉(zhuǎn)移4微升到996微升的1倍稀釋液中進(jìn)行稀釋。這產(chǎn)生1:50,000的樣本稀釋。在每個(gè)階段c底混合。

結(jié)果計(jì)算

從每個(gè)孔的測試值中減去平均背景值（標(biāo)準(zhǔn)零的平均吸光度讀數(shù)）。

平均每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品的雙份讀數(shù)，并使用結(jié)果構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線。通過使用能夠生成4參數(shù)邏輯曲線擬合的計(jì)算機(jī)軟件來減少數(shù)據(jù)來構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線。也可以使用二階多項(xiàng)式（二次）或其他曲線擬合；然而，它們對數(shù)據(jù)的擬合將不夠精確。

從標(biāo)準(zhǔn)曲線中插值得到測試樣本值。校正血清稀釋因子，得出原始樣本中IgG2a的濃度。

ALPCO產(chǎn)品種類多樣，可測樣品來源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、豬、羊、狗、猴等，涉及神經(jīng)生物學(xué)、骨代謝、心血管疾病和氧化應(yīng)激、細(xì)胞因子與信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、糖尿病和肥胖癥、內(nèi)分泌學(xué)、甲狀腺功能、腸胃病學(xué)、免疫學(xué)、生殖激素、抗體和抗原、分子診斷等多個(gè)研究領(lǐng)域，尤以糖尿病和肥胖癥研究領(lǐng)域見長。

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