將高濃度和低濃度的純化猴IgM分別摻入3種血清中樣品。與預(yù)期值相比，觀察到的測(cè)定值范圍為83至105%，表明猴血清中IgM的準(zhǔn)確定量。

作為Alpha Diagnostic International（ADI）在中國(guó)的區(qū)域總代理，艾美捷科技強(qiáng)烈推薦Alpha Diagnostic International（ADI）熱銷產(chǎn)品猴 IgM ELISA 試劑盒，96 次檢測(cè)，定量。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

未提供但必需的材料：

- 能夠提供100ul和1-10ml的移液器和移液管。建議使用多通道移液器。

- 用于稀釋樣品和抗猴IgM-HRP濃縮液的一次性玻璃或塑料1-15ml試管。

- 用于稀釋洗滌濃縮液和樣品稀釋液濃縮液的量筒；200ml至1L。

- 用于儲(chǔ)存稀釋洗滌液的儲(chǔ)液瓶；200ml至1L。

- 用于稀釋試劑濃縮液的蒸餾水或去離子水。

- 在450納米波長(zhǎng)下的微孔板讀取器。

樣本收集和處理

通過(guò)靜脈采血，允許凝血，并在室溫下通過(guò)離心分離血清。不要加熱滅活血清。如果血清不立即檢測(cè)，可冷藏保存最多2周，或冷凍長(zhǎng)期保存。避免凍融循環(huán)。

尚未研究使用血漿，但應(yīng)該是適合檢測(cè)的樣本。

注意事項(xiàng)和安全指南

猴血清可能含有人畜共患的、跨物種的傳染性物質(zhì)。處理含有血清的樣本時(shí)，包括標(biāo)準(zhǔn)品和對(duì)照品，始終要戴手套，并把這些樣本和容器作為生物危害廢物處理。

校準(zhǔn)器、樣品稀釋液和抗體HRP含有溴硝基二噁烷（BND：0.05%，w/v）。終止液含有稀釋的硫酸。請(qǐng)遵循良好的實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)范，避免任何試劑與皮膚、眼睛或粘膜接觸。所有試劑都可以用大量水沖入下水道。TMB、硫酸和BND的MSDS可以請(qǐng)求或從ADI網(wǎng)站獲得：樣品稀釋液和抗蛋白G-HRP含有Proclin 300（0.05%，v/v）。

質(zhì)量控制：

準(zhǔn)確和可重復(fù)的檢測(cè)結(jié)果依賴于適當(dāng)?shù)拇鎯?chǔ)、處理和控制試劑和樣本溫度。按照指示存儲(chǔ)所有試劑，并只將用于檢測(cè)的試劑預(yù)熱至室溫。關(guān)鍵試劑和樣本的保質(zhì)期會(huì)因長(zhǎng)時(shí)間暴露在非冷藏條件下而縮短，導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果不準(zhǔn)確。

所有溶液應(yīng)清澈。渾濁或有顆粒物是試劑污染或不穩(wěn)定的跡象，可能會(huì)干擾檢測(cè)的正常進(jìn)行。如有此情況，請(qǐng)勿使用。

樣本對(duì)照品 試劑盒中提供了一個(gè)陽(yáng)性血清對(duì)照品，并賦予了IgM濃度值范圍。在此范圍內(nèi)的恢復(fù)是檢測(cè)性能良好的指標(biāo)。

每個(gè)實(shí)驗(yàn)室還應(yīng)檢測(cè)內(nèi)部對(duì)照樣本，這些樣本代表實(shí)驗(yàn)室預(yù)期的樣本人群，并且保持穩(wěn)定。也應(yīng)該運(yùn)行一個(gè)樣品稀釋液陰性對(duì)照。

標(biāo)準(zhǔn)曲線 標(biāo)準(zhǔn)品產(chǎn)生的信號(hào)應(yīng)該從z低標(biāo)準(zhǔn)到最高標(biāo)準(zhǔn)連續(xù)增加OD，差異大于1.2 OD。

不連續(xù)增加或低信號(hào)可能表明技術(shù)、協(xié)議指導(dǎo)和/或試劑準(zhǔn)備、使用或穩(wěn)定性存在問(wèn)題。陰性稀釋對(duì)照的信號(hào)應(yīng)低于z低標(biāo)準(zhǔn)。不要依賴于存在這些問(wèn)題的檢測(cè)產(chǎn)生的結(jié)果。

技術(shù) 準(zhǔn)確和可重復(fù)的檢測(cè)結(jié)果依賴于良好的實(shí)驗(yàn)室技術(shù)，包括移液、板洗滌和處理樣本及試劑。

檢測(cè)程序：

將所有試劑預(yù)熱至實(shí)驗(yàn)室溫度（18-30攝氏度）平衡（至少30分鐘）。

在工作樣品稀釋液中稀釋血清樣本。對(duì)于大多數(shù)正常的猴血清，大約4000倍的稀釋是適當(dāng)?shù)摹榱藴?zhǔn)確性，建議進(jìn)行兩個(gè)稀釋步驟，如下：

1) 10ul血清 + 990ul稀釋液 = [1:100]，

2) 25ul [1:100] + 975ul稀釋液 = [1:4000]。

不要稀釋標(biāo)準(zhǔn)品或陽(yáng)性對(duì)照血清。

結(jié)果計(jì)算：

可以使用任何免疫分析軟件包計(jì)算結(jié)果。推薦使用四參數(shù)曲線擬合。如果軟件不可用，可以按照以下方法確定IgM濃度：

2. 計(jì)算重復(fù)樣本的平均OD值。

3. 在坐標(biāo)紙上，將標(biāo)準(zhǔn)品的平均OD值（y軸）與IgM的濃度（ng/ml）（x軸）作圖。通過(guò)這些點(diǎn)繪制最佳擬合曲線以構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線。點(diǎn)對(duì)點(diǎn)構(gòu)造最常見(jiàn)且可靠。

4. 可以通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線插值確定未知樣本和對(duì)照品中的IgM濃度。

5. 將樣本獲得的值乘以每個(gè)樣本的稀釋因子。

6. 產(chǎn)生信號(hào)高于1000 ng/ml標(biāo)準(zhǔn)品的樣本應(yīng)進(jìn)一步稀釋并重新檢測(cè)。

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Alpha Diagnostic International（ADI）公司于1993年成立， 是一家美國(guó)私營(yíng)生物技術(shù)公司，總部位于德克薩斯州圣安東尼奧，具有USDA認(rèn)證的動(dòng)物試驗(yàn)設(shè)施。公司致力于開(kāi)發(fā)、制造和供應(yīng)新型診斷和質(zhì)量控制試劑及檢測(cè)試劑盒，用于人類和動(dòng)物的基礎(chǔ)生物學(xué)和疾病研究。同時(shí)，還提供多肽合成定制服務(wù)和多抗產(chǎn)品以及其他抗體相關(guān)服務(wù)，例如純化親和素，酶耦聯(lián)物，染料，熒光染料等。ADI旨在準(zhǔn)確了解科學(xué)研究人員和診斷測(cè)試界的需求，并迅速提供有效的解決方案，成為科學(xué)界值得信賴的創(chuàng)新試劑和解決方案提供商。

艾美捷科技是Alpha Diagnostic International（ADI）的中國(guó)代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。

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