詳細介紹
快速DNA連接試劑盒(Rapid DNA Ligation Kit) 是上海雅吉研發(fā)的一種把DNA段在短至5-10分鐘內快速插入到載體(vector)中的連接試劑盒。對于雙粘端DNA段的插入僅需5-10分鐘即可完成,對于雙平端DNA段的插入僅需15分鐘即可完成。同時本試劑盒也可以用于其它各種常規(guī)的雙鏈DNA連接反應。連接30分鐘即可達到*效果,與連接過夜的效果*。
本試劑盒可以用于PCR片段和載體的連接、酶切產物和載體的連接、linker和載體的連接、linker和linker的連接等各種雙鏈DNA的連接。
為了獲得快速高效的連接效果,本試劑盒采用了一種特殊的高活力Rapid T4 DNA Ligase以及相應的快速連接緩沖液,確保在短時間內可以獲得很好的連接效果。連接30分鐘和連接過夜的效果相當,通常只須連接5-10分鐘即可滿足常規(guī)用途(圖1)。
圖1.快速DNA連接試劑盒實測效果圖。雙酶切后的載體室溫自連30min(A)或16℃自連過夜(D)作為陰性對照;雙酶切后的載體與待插入片段室溫連接10min(B)、30min(C)或者16℃連接過夜(E),隨后轉化細菌涂板,并于第二天取平板觀察拍照。
在確保連接效果的同時,確保完成連接后不必進行任何純化即可直接轉化細菌。另外,快速連接緩沖液中已經含有ATP、鎂離子等各種必需物質,無需再添加其它任何試劑。
用于總體積為10μl的連接體系時可以進行100個連接反應,用于總體積為20μl的連接體系時可以進行50個連接反應。
包裝清單:
產品編號 產品名稱 包裝
D7002-1 快速連接緩沖液(2X) 0.5ml
D7002-2 Rapid T4 DNA ligase 50μl
— 說明書 1份
保存條件:
-20℃保存。
注意事項:
連接反應完成后即可直接轉化細菌,請勿采用加熱方法失活Rapid T4 DNA ligase。加熱處理會導致后續(xù)的轉化效率顯著下降。
對于載體單酶切插入外源片段的情況,需注意對載體進行脫磷處理,以避免質粒自連。
快速連接緩沖液(2X)使用前一定要*溶解并混勻,加入到連接體系后也須注意混勻。
*于專業(yè)人員的科學研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內。
為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。