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1、配制過(guò)濾除菌的細(xì)胞培養(yǎng)基

(1) 閱讀培養(yǎng)基使用說(shuō)明，確定需要添加何種添加劑（如NaHCO3、L-谷氨酰胺、丙酮酸鈉、HEPES等）。

(2) 根據(jù)所需將培養(yǎng)基全部倒入一容器中，用少量注射用水（20℃～30℃）將袋內(nèi)殘留培養(yǎng)基洗下，并入容器。加注射用水至總體積的95％，輕微攪拌溶解。

(3) 加入規(guī)定量的碳酸氫鈉及所要添加的物質(zhì)。

(4) 輕微攪拌溶解，加注射用水至規(guī)定體積。

(5) 用1 mol / L 氫氧化鈉溶液或 1 mol / L 鹽酸溶液調(diào)pH至所需值。

(6) 用0.22 μm濾膜正壓過(guò)濾除菌。

(7) 溶液應(yīng)在2℃－8℃下避光保存。

具體使用方法參照培養(yǎng)基包裝袋上的說(shuō)明書(shū)。

2、配制可高壓滅菌細(xì)胞培養(yǎng)基

(1) 根據(jù)所需將培養(yǎng)基全部倒入一容器中，用少量注射用水（20℃～30℃）將袋內(nèi)殘留培養(yǎng)基洗下，并入容器。加注射用水至總體積的95％，輕微攪拌溶解

(2) 在121℃、15psi下滅菌15分鐘。

(3) 待溶液冷卻至室溫，加入無(wú)菌0.2 mol / L L－谷氨酰胺溶液規(guī)定體積、無(wú)菌7.5％（w/v）碳酸氫鈉溶液規(guī)定體積，加注射用水（20℃～30℃）至規(guī)定體積，混勻。

(4) 如果必要，用1 mol / L 氫氧化鈉溶液或 1 mol / L 鹽酸溶液調(diào)pH至所需值。

(5) 溶液應(yīng)在2℃－8℃下避光保存。

具體使用方法參照培養(yǎng)基包裝袋上的說(shuō)明書(shū)

注意事項(xiàng)：

1） 細(xì)胞培養(yǎng)用水一般為三蒸水（經(jīng)石英蒸餾器蒸餾）或超純水，醫(yī)藥生產(chǎn)上一般為注射用水。

2） 建議盡量選擇與所用量相匹配的包裝一次使用，因?yàn)榘b一旦打開(kāi)，組分可能會(huì)變質(zhì)或因受潮而結(jié)團(tuán)。

3） 溶解干粉培養(yǎng)基時(shí)先加入終體積90％－95％的培養(yǎng)用水，添加劑加完后再補(bǔ)足。

4） 如需添加的組分較多時(shí)，某一組分全溶解后，再添加另一組分。

5） 待培養(yǎng)基全溶解后再加入碳酸氫鈉，以免產(chǎn)生沉淀。

6） 所有成分全溶解后，培養(yǎng)基應(yīng)立即過(guò)濾或高壓除菌，以免產(chǎn)生沉淀或有微生物污染。

7） 在過(guò)濾除菌時(shí)，一般情況下應(yīng)調(diào)pH比所需值低0.1～0.2個(gè)單位，因過(guò)濾除菌后，pH值會(huì)升高約0.2。

8） 在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，建議不加或加少量的抗生素，如血清的濃度較低則所加抗生素的量也要相應(yīng)降低一些。

9） 建議用1 N HCl或1 N NaOH來(lái)調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH，因?yàn)橛锰妓釟溻c來(lái)調(diào)對(duì)培養(yǎng)液的滲透壓影響比較大。