培養(yǎng)操作步驟:
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
產(chǎn)品屬于:
商品介紹:
Chlorotoxin是從雷蛇屬以色列蝎子的毒液中提取的由36個(gè)氨基酸組成的肽段,具有抗癌活性;抑制U251MG細(xì)胞遷移的IC50值為600nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):163515-35-3 純度:97.35% 分子量:3995.71 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
副豬嗜血桿菌Bensingtonia yamatoana
金針菇Sporobolomyces ruber
產(chǎn)脲節(jié)桿菌Candida nitrativorans
球孢白僵菌Candida krissii
水叢毛單胞菌Trichosporon laibachii
弗氏鏈霉菌Mrakia psychrophila
谷棒桿菌Trichosporon laibachii
豇豆慢生根瘤菌Candida maltosa
粗壯假絲酵母Bensingtonia yamatoana
枯草芽孢桿菌Candida tropicalis
紫芝Kluyveromyces marxianus
灰綠曲霉Kluyveromyces marxianus
土壤短波單胞菌Mrakia stokesii
茶樹菇Cryptococcus aquaticus
巴氏醋桿菌Candida ethanolica
罕見芽孢桿菌Candida ethanolica
小鼠抗甲狀腺過(guò)氧化物抗體(TPO-Ab)免疫試劑盒肌側(cè)索硬化癥相關(guān)蛋白2(2號(hào)染色體)抗體人抗組織轉(zhuǎn)谷??贵wIgA(tTG-IgA)ELISA試劑盒輪環(huán)藤堿
小鼠抗肌內(nèi)膜抗體IgA(EMA IgA)免疫試劑盒三磷腺檸檬裂解抗體人抗組織轉(zhuǎn)谷??贵wIgA(tTG-IgA)ELISA試劑盒輪環(huán)藤寧
小鼠抗環(huán)胍肽抗體(Anti-CCP-antibody)免疫試劑盒β淀粉樣蛋白前體結(jié)合蛋白B-1抗體人抗存活抗體/生存蛋白(Surv)ELISA試劑盒羅丹明B
小鼠抗核小體抗體(IgG)免疫試劑盒內(nèi)收蛋白a1抗體人抗存活抗體/生存蛋白(Surv)ELISA試劑盒羅漢果苷III
U251MG細(xì)胞遷移抑制劑(Chlorotoxin)CBZ-D-脯
其他N-芐氧羰基-D-脯
英文名稱:Z-D-Pro-OH
其他英文名稱:(+)-Z-D-proline ;N-Carbobenzoxy-D-proline
產(chǎn)品規(guī)格:特純,99%
包裝:5克/25克/100克
CAS號(hào):6404-31-5
C13H15NO4=249.26
級(jí)別:Purum
含量:≥99.0%
熔點(diǎn):76~78℃
比旋光度:+40.2°(c=2, EtOH)
性狀:細(xì)粉末晶體
用途:生化研究
保存:RT