培養(yǎng)操作步驟:
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
產(chǎn)品屬于:
商品介紹:
A-674563hydrochloride是具有選擇性的高效Akt1抑制劑,其Ki值為11nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 純度:99.26% 分子量:394.9 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
植物乳桿菌Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus
大腸埃希氏菌Xanthomonas campestris pv. malvacearum
海棗曲霉Streptococcus agalactiae
腸膜明串珠菌Cellulomonas varians
Brenneria salicisLactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus
繩狀籃狀菌Corynebacterium thermophilum
產(chǎn)黃青霉Corynebacterium deparaffinicum
海水鹽單胞菌Xanthomonas campestris pv. holcicola
毛草蓋菌Xanthomonas campestris pv. holcicola
灰葡萄孢(灰霉病菌)Proteus vulgaris
菌核曲霉Providencia stuartii
炭疽芽孢桿菌Klebsiella pneumoniae subsp. pneumoniae
谷棒桿菌Flavobacterium oryzae
隱藏青霉Arthrobacter luteus
Litorimicrobium taeanenseListonella pelagia
桿菌狀鏈霉菌Vibrio splendidus
豬環(huán)磷腺苷(cAMP)免疫試劑盒磷化脊髓小腦失調(diào)癥蛋白1抗體人血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子C(VEGF-C)ELISA試劑盒川翠定甲
豬環(huán)磷鳥苷(cGMP)免疫試劑盒磷化活化轉(zhuǎn)錄因子1抗體人血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子C(VEGF-C)ELISA試劑盒川楝
豬化學(xué)趨化因子(KC)免疫試劑盒磷化活化復(fù)制因子2抗體人血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子D(VEGF-D)ELISA試劑盒川麥冬甘A
豬紅生成(EPO)免疫試劑盒磷化活化復(fù)制因子2抗體人血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子D(VEGF-D)ELISA試劑盒川芎
Akt1抑制劑(A-674563 hydrochloride)D-葡萄糖醛內(nèi)酯
其他D-葡萄糖醛-r-內(nèi)酯;D-葡萄糖醛-G-內(nèi)酯;呋喃糖醛-r-內(nèi)酯;葡醛酯;葡醛內(nèi)酯;D(+)-葡糖醛-3,6-內(nèi)酯;D-葡糖醛-γ-內(nèi)酯;肝泰樂
英文名稱:D-Glucurone
其他英文名稱:D-(+)-Glucuronic acid γ-lactone;D-Glucurono-6,3-lactone;D(+)-Glucurono-3,6-lactone
產(chǎn)品規(guī)格:高純,99%
包裝:25克/100克/500克
CAS號(hào):32449-92-6
C6H8O6=176.12
級(jí)別:High purity grade
含量:≥99%
比旋光度:+18.0~+20.0°
保存:2~8℃