人胰腺腫瘤成纖維細(xì)胞永生化公司正在出售的產(chǎn)品：人急性T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞Jurkat，CloneE6-1 (STR鑒定正確)小鼠肺癌細(xì)胞紅色熒光LLC+RFP（種屬鑒定）人骨肉瘤細(xì)胞帶熒光143B+LUC(STR鑒定正確)小鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞 HT22（種屬鑒定）小鼠肺泡上皮細(xì)胞 MLE-12（種屬鑒定）小鼠腎小球系膜細(xì)胞SV40-MES-13 （種屬鑒定）非洲綠猴腎細(xì)胞CV-1（種屬鑒定）

一、細(xì)胞基本屬性

細(xì)胞詳述

癌組織由實(shí)質(zhì)和間質(zhì)兩部分構(gòu)成，癌細(xì)胞構(gòu)成癌實(shí)質(zhì)，是癌的主要成分，具有組織來(lái)源特異性，癌間質(zhì)一般由結(jié)締組織和血管組成，起支持和營(yíng)養(yǎng)癌實(shí)質(zhì)的作用，不具有特異性。

當(dāng)實(shí)體瘤超過(guò)1-2mm時(shí)，需要通過(guò)新生的血管和活化的癌相關(guān)成纖維細(xì)胞來(lái)獲取癌細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖所必須的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。其中，癌相關(guān)成纖維細(xì)胞可通過(guò)分泌多種細(xì)胞因子和生長(zhǎng)因子來(lái)發(fā)揮促進(jìn)癌血管生成的作用。

上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）是一種胚胎發(fā)育期的表型轉(zhuǎn)化，在腫瘤轉(zhuǎn)移過(guò)程中也能觀察到相似的EMT過(guò)程。而由上皮和間質(zhì)相互作用所形成的腫瘤-宿主界面微環(huán)境的平衡狀態(tài)直接決定腫瘤的發(fā)生發(fā)展。多種因素可影響該界面，其中癌相關(guān)成纖維細(xì)胞是數(shù)量豐富的基質(zhì)細(xì)胞，在調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞EMT過(guò)程中發(fā)揮重要作用。它通過(guò)細(xì)胞與細(xì)胞間相互接觸及分泌各種細(xì)胞因子、蛋白酶類(lèi)等，促進(jìn)上皮細(xì)胞及其細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化，并對(duì)界面各組分產(chǎn)生重要的調(diào)控作用。

該細(xì)胞通過(guò)慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶SV40基因。

注意事項(xiàng)：  收到細(xì)胞后第一次傳代建議1：2傳代，充液培養(yǎng)基是維持培養(yǎng)基，不能用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。

細(xì)胞特性

1） 細(xì)胞來(lái)源于人手術(shù)胰腺癌組織。

2） 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。

3） 細(xì)胞生長(zhǎng)方式：長(zhǎng)梭形，貼壁培養(yǎng)。

二、細(xì)胞培養(yǎng)狀態(tài)

發(fā)貨時(shí)發(fā)送細(xì)胞電子版照片

三、使用方法

客戶(hù)收到細(xì)胞后，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作。

1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。

2. 貼壁細(xì)胞消化

1)吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次；

2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底后，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化；

3)用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補(bǔ)充新鮮的培養(yǎng)基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；

4)待細(xì)胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基。

3. 細(xì)胞收貨脫落

1)收集所有細(xì)胞懸液，1000rpm，離心5min，保留沉淀；

2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)；消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化；

3)經(jīng)1000rpm，離心5min，丟棄上清，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)；

4)待細(xì)胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預(yù)熱)。

5)原瓶?jī)?nèi)貼壁細(xì)胞按正常消化處理。

4. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)

因原代細(xì)胞貼壁特殊性，貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實(shí)驗(yàn)器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時(shí)，需要對(duì)實(shí)驗(yàn)器皿進(jìn)行包被，以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性，避免細(xì)胞因沒(méi)貼好影響實(shí)驗(yàn)；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴(lài)氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%），依據(jù)細(xì)胞種類(lèi)而定。懸浮/半懸浮細(xì)胞無(wú)需包被。

四、注意事項(xiàng)

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個(gè)月。

2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，請(qǐng)注意保持無(wú)菌操作。

3. 傳代培養(yǎng)過(guò)程中，消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長(zhǎng)狀態(tài)。

4. 建議客戶(hù)收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和技術(shù)部溝通；由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，詳盡告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪(fǎng)直至問(wèn)題得到解決。

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