詳細介紹
培養(yǎng)操作步驟:
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
產(chǎn)品屬于:
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
b-AP15 | 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg | 1~3天 |
商品介紹:
b-AP15特異性抑制去泛素化酶(deubiquitinating)UCHL5和Usp14活性。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:1009817-63-3 別名:NSC 687852 純度:98.03% 分子量:419.39 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
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盤長孢狀刺盤孢Glomerella│cingulata (Stoneman) Spauld. & H. Schrenk 質(zhì)量規(guī)格:98%,美國進口
麥芽糖假絲酵母Candida│maltosa 質(zhì)量規(guī)格:>98%,進分
谷棒桿菌Ⅰ型Corynebacterium│glutamicum Ⅰ 質(zhì)量規(guī)格:>98%,進分
UCHL5和Usp14活性抑制劑(b-AP15)堿性藍26
其他維多利亞藍B;堿性品藍B;堿性艷藍B;鹽基品藍B;維多利亞蘭B;品藍B;勝利藍B
英文名稱:Basic Blue 26
其他英文名稱:[4-[[4-Anilino-1-naphthyl][4-(dimethylamino)phenyl]methylene]cyclohexa-2,5-dien-1-ylidene]dimethylammonium chloride;Victoria Blue B;C.I. 44045
產(chǎn)品規(guī)格:IND,80%
包裝:25克
CAS號:2580-56-5
C33H32ClN3=506.09
級別:IND
含量:≥80%
Lambda Max:599~605nm in ethanol
干燥失重:≤5.0%
性狀:青銅色發(fā)光顆?;蜃瞎夥勰?。溶于熱水呈藍色,溶于乙為純藍色,微溶于冷水。熔點 206℃(分解)。大吸收波長 599nm
性狀:紅棕色粉末。溶于稀堿溶液呈紅紫色,微溶于沸乙、、乙和甲,均呈黃色,幾乎不溶于水。熔點199~200℃。有刺激性
用途:生化研究。鎂和鉬的測定。吸附指示劑
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