操作規(guī)程:
1、在96孔板加入細(xì)胞00μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入00微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入00微升5000~0000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~0μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及00%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成× MTT 溶液。
5、每孔加50μL × MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加50μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×00
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 0%時(shí)的藥物濃度(IC90)
中文名稱:RHA與EWS-FLI1結(jié)合抑制劑(YK-4-279)
英文名稱:YK-4-279 產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg 發(fā)貨周期:1~3天 YK4-279是RNA解旋酶A(RHA)與致癌轉(zhuǎn)錄因子EWS-FLI1結(jié)合抑制劑,能抑制ESFT細(xì)胞增長(zhǎng),誘導(dǎo)凋亡。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):1037184-44-3 純度:99.61% 分子量:366.2 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
注意事項(xiàng):
1、本試劑盒僅供科學(xué)研究使用,不可用于診斷或治療。
2、螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心,將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底,避免開蓋時(shí)試劑損失。
3、禁止與其他品牌的試劑混用,否則會(huì)影響使用效果。
4、樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。
5、最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿,可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并*清除殘留清潔劑。
6、避免皮膚或粘膜與試劑接觸。
7、需長(zhǎng)時(shí)間保存可-20℃避光保存。避免反復(fù)凍融,否則將會(huì)增加空白吸收,從而影響檢測(cè)結(jié)果。最好小劑量分裝,用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光。
8、用培養(yǎng)基或 PBS 來配制待檢測(cè)藥物。如果待測(cè)藥物有還原性,則測(cè)定不含細(xì)胞,僅含有 MTS 的待測(cè)藥物溶液在 490 nm處的空白吸光度。如果該吸光度很小,則可以直接加入 MTS ,如果吸光度相對(duì)較大,則需要除去培養(yǎng)基,并用新鮮培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次,然后加入新的 100 μl 培養(yǎng)基和 10 μl MTS 進(jìn)行檢測(cè)。
9、細(xì)胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細(xì)胞。
10、加 MTS 溶液后孵育時(shí)間的長(zhǎng)短根據(jù)細(xì)胞的類型和細(xì)胞的密度等實(shí)驗(yàn)情況而定,對(duì)于大多數(shù)情況孵育 1 小時(shí)即可,白細(xì)胞需要培養(yǎng)較長(zhǎng)時(shí)間。
11、如果不是使用 96 孔板檢測(cè),MTS 溶液的用量相應(yīng)等比例增加即可。
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prox-1抗體大孢綠僵菌=金龜子綠僵菌大孢變種腎功能 腎功能 腎功能 腎功能 腎功能 腎功能
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RHA與EWS-FLI1結(jié)合抑制劑(YK-4-279)α-半乳糖苷
其他α-D-半乳糖苷半乳糖水解;蜜二糖
英文名稱:α-Galactosidase preparation from green coffee beans
產(chǎn)品規(guī)格:BR,9u/mg
包裝:5U/50U
CAS號(hào):9025-35-8
級(jí)別:BR
分子量:約37.3KDa
活力:≥9units/mg protein
活力定義:One unit will hydrolyze 1.0 μmole of p-nitrophenyl α-D-galactoside to p-nitrophenol and D-galactose per min at pH 6.5 at 25℃
Protein by lowry:4.5~5.0mg protein/ml
性狀:懸浮液,Suspension in 3.2 M (NH4)2SO4 solution, pH 6.0, containing BSA
性狀:淡黃色粉末,無臭,微甜。一種能把乳糖水解成葡萄糖和半乳糖的。一般是指能將β-半乳糖苷水解為半乳糖和糖苷的。在水中呈混沌液(大部分溶解),不溶于乙、。PH范圍5.5~9.5(25℃,20hr),適pH7.0,適作用溫度50℃。測(cè)活時(shí),粉末用100mM pH7.3磷鉀緩沖液溶解成透明液體。
用途:生化研究。β-半乳糖苷能夠水解通過β-1→4糖苷鍵連接在單糖、寡糖或糖肽上的半乳糖殘基。它主要用于聯(lián)檢測(cè)中,偶聯(lián)在抗體上作為標(biāo)記物。此外,β-半乳糖苷還可用于糖類結(jié)構(gòu)分析、乳糖檢測(cè)和鈉離子檢測(cè)
保存:2~8℃