操作規(guī)程:
1、在96孔板加入細(xì)胞00μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入00微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入00微升5000~0000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~0μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及00%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成× MTT 溶液。
5、每孔加50μL × MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加50μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×00
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 0%時(shí)的藥物濃度(IC90)
中文名稱(chēng):Mcl1高效抑制劑(Pyridoclax)
英文名稱(chēng):Pyridoclax 產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg 發(fā)貨周期:1~3天 Pyridoclax(MR-29072)是Mcl1高效抑制劑,Kd值為25nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):1651890-44-6 別名:MR-29072 分子量:426.51 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
注意事項(xiàng):
1、本試劑盒僅供科學(xué)研究使用,不可用于診斷或治療。
2、螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開(kāi)蓋前請(qǐng)短暫離心,將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底,避免開(kāi)蓋時(shí)試劑損失。
3、禁止與其他品牌的試劑混用,否則會(huì)影響使用效果。
4、樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。
5、最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿,可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并*清除殘留清潔劑。
6、避免皮膚或粘膜與試劑接觸。
7、需長(zhǎng)時(shí)間保存可-20℃避光保存。避免反復(fù)凍融,否則將會(huì)增加空白吸收,從而影響檢測(cè)結(jié)果。最好小劑量分裝,用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光。
8、用培養(yǎng)基或 PBS 來(lái)配制待檢測(cè)藥物。如果待測(cè)藥物有還原性,則測(cè)定不含細(xì)胞,僅含有 MTS 的待測(cè)藥物溶液在 490 nm處的空白吸光度。如果該吸光度很小,則可以直接加入 MTS ,如果吸光度相對(duì)較大,則需要除去培養(yǎng)基,并用新鮮培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次,然后加入新的 100 μl 培養(yǎng)基和 10 μl MTS 進(jìn)行檢測(cè)。
9、細(xì)胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細(xì)胞。
10、加 MTS 溶液后孵育時(shí)間的長(zhǎng)短根據(jù)細(xì)胞的類(lèi)型和細(xì)胞的密度等實(shí)驗(yàn)情況而定,對(duì)于大多數(shù)情況孵育 1 小時(shí)即可,白細(xì)胞需要培養(yǎng)較長(zhǎng)時(shí)間。
11、如果不是使用 96 孔板檢測(cè),MTS 溶液的用量相應(yīng)等比例增加即可。
大腸埃希氏菌Arthrobacter sulfonivorans
泡盛曲霉Arthrobacter citreus
Marivirga sp.Arthrobacter nicotinovorans
草青霉Agromyces brachium
異常漢遜酵母Agromyces luteolus
金黃色葡萄球菌金黃亞種Geobacillus stearothermophilus
合適檸檬桿菌Geobacillus stearothermophilus
淡紫擬青霉Lactococcus lactis subsp. cremoris
雜色曲霉Agromyces mediolanus
四脊裸胞殼Delftia acidovorans
根瘤菌Rhodococcus erythropolis
假單胞菌屬Rhodococcus sp.
釀酒酵母Rhodococcus sp.
斑污擬盤(pán)多孔孢Rhodococcus sp.
蘇云金芽孢桿菌庫(kù)爾斯塔克亞種Rhodococcus sp.
熱帶假絲酵母Rhodococcus sp.
基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1抗體硝鹽陰性不動(dòng)桿菌日本絲孢酵母
心肌肌球蛋白抗體α-myosin傷寒沙門(mén)氏菌解脂耶羅維亞酵母
細(xì)胞因子信號(hào)傳導(dǎo)抑制蛋白1抗體咽峽炎鏈球菌金色隱球酵母
Mcl1高效抑制劑(Pyridoclax)L-谷酰胺
其他L-(+)-2-基-5-酰胺;L-麩酰胺;L-谷酰胺;L-羰基丁;L-2-基戊二酰胺;L-谷-5-酰胺;L-谷酰胺;L-酰胺;左谷酰胺
英文名稱(chēng):L-Glutamine
其他英文名稱(chēng):L-α-Aminoglutamic acid;L-Glutamic acid 5-amide;L-Gln;H-Gln-OH
產(chǎn)品規(guī)格:BR,99%
包裝:25克/100克/500克
CAS號(hào):56-85-9
C5H10N2O3=146.15
級(jí)別:BR
含量:≥99.0%
比旋光度:+6.3~+7.3o
PH:4.0~6.0
干燥失重:≤0.30%
砷鹽:≤1ppm
灼燒殘?jiān)?/span>≤0.30%
重金屬:≤15ppm
性狀:結(jié)晶粉末。在中性或弱性沸騰溶液中,迅即轉(zhuǎn)化為吡咯羧的銨鹽。1G,30℃時(shí)溶于20.8ml水中,18℃時(shí)溶于38.5ml水中,0℃時(shí)溶于56.7ml水中,幾乎不溶于甲、乙、、、和乙乙酯。熔點(diǎn)185~186℃(分解)。
用途:生化研究。培養(yǎng)基
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