操作規(guī)程:
1、在96孔板加入細(xì)胞00μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入00微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入00微升5000~0000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~0μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及00%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成× MTT 溶液。
5、每孔加50μL × MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加50μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×00
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 0%時(shí)的藥物濃度(IC90)
中文名稱:mTOR抑制劑(WYE-125132)
英文名稱:WYE-125132 產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg 發(fā)貨周期:1~3天 WYE-125132是ATP競(jìng)爭(zhēng)性mTOR選擇性抑制劑,IC50為0.19nM,對(duì)PI3Ks及其相關(guān)的hSMG1和ATR抑制性較弱。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):1144068-46-1 純度:98.39% 分子量:519.6 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
注意事項(xiàng):
1、本試劑盒僅供科學(xué)研究使用,不可用于診斷或治療。
2、螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開(kāi)蓋前請(qǐng)短暫離心,將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底,避免開(kāi)蓋時(shí)試劑損失。
3、禁止與其他品牌的試劑混用,否則會(huì)影響使用效果。
4、樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。
5、最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿,可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并*清除殘留清潔劑。
6、避免皮膚或粘膜與試劑接觸。
7、需長(zhǎng)時(shí)間保存可-20℃避光保存。避免反復(fù)凍融,否則將會(huì)增加空白吸收,從而影響檢測(cè)結(jié)果。最好小劑量分裝,用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光。
8、用培養(yǎng)基或 PBS 來(lái)配制待檢測(cè)藥物。如果待測(cè)藥物有還原性,則測(cè)定不含細(xì)胞,僅含有 MTS 的待測(cè)藥物溶液在 490 nm處的空白吸光度。如果該吸光度很小,則可以直接加入 MTS ,如果吸光度相對(duì)較大,則需要除去培養(yǎng)基,并用新鮮培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次,然后加入新的 100 μl 培養(yǎng)基和 10 μl MTS 進(jìn)行檢測(cè)。
9、細(xì)胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細(xì)胞。
10、加 MTS 溶液后孵育時(shí)間的長(zhǎng)短根據(jù)細(xì)胞的類型和細(xì)胞的密度等實(shí)驗(yàn)情況而定,對(duì)于大多數(shù)情況孵育 1 小時(shí)即可,白細(xì)胞需要培養(yǎng)較長(zhǎng)時(shí)間。
11、如果不是使用 96 孔板檢測(cè),MTS 溶液的用量相應(yīng)等比例增加即可。
雞傳染性支氣管炎病Agrococcus baldri
谷棒桿菌Virgibacillus necropolis
黃暗青霉Rhodococcus aetherivorans
多根硬皮馬勃Dietzia natronolimnaea
卡門(mén)柏青霉Agrococcus citreus
動(dòng)物雙歧桿菌乳亞種Dietzia psychralcaliphila
大腸埃希氏菌Virgibacillus carmonensis
里拉微球菌Salinibacterium amurskyense
普通青霉Colwellia polaris
地衣芽孢桿菌Colwellia sp.
Pseudoclavibacter soli Kim and Jung Halomonas gudaonensis
多形許旺酵母Marinobacter gudaonensis
焦曲霉Bacillus qingdaonensis
雞白痢沙門(mén)氏菌Halomonas sp.
埃里鏈格孢Shewanella psychrophila
蜜生假絲酵母Arthrobacter psygalactophilus
: ATCC14474資源名稱: 微黃分枝桿菌 質(zhì)量規(guī)格:含量測(cè)定
海綿假單胞菌Pseudomonas│pachastrellae 質(zhì)量規(guī)格:UV法溶出度檢查
圖畫(huà)大洋芽孢桿菌Oceanobacillus│picturae 質(zhì)量規(guī)格:UV法含量測(cè)定
mTOR抑制劑(WYE-125132)L-甘-白二肽
其他甘酰-L-亮;甘-L-白;甘-L-閃白;甘-L-亮;N-甘酰-L-白;甘縮-L-閃白基
英文名稱:Gly-Leu
其他英文名稱:Glycyl-L-leucine
產(chǎn)品規(guī)格:BR,98%
包裝:1克/5克/25克
CAS號(hào):869-19-2
C8H16N2O3=188.22
級(jí)別:BR
含量:≥98.0%
比旋光度:-36±1°
PH:5.0~6.5
鑒別:合格
鐵鹽:≤10ppm
重金屬:≤10ppm
砷鹽:≤1ppm
性狀:結(jié)晶粉末或片狀結(jié)晶。易溶于水,不溶于乙。加熱到246℃即成黃色。熔點(diǎn):256℃(分解)
用途:生化研究
保存:RT