兔冠狀動脈內(nèi)皮細胞公司正在出售的產(chǎn)品：粉紋夜蛾細胞系；QAU-Tn-E-7小鼠雜交瘤細胞株；JSCH6B6暗黑鰓金龜細胞系；QAU-Hp-E-9-2華北大黑鰓金龜細胞系；QAU-Ho-E-6-22小鼠雜交瘤細胞株；HIRRV-G-4D小鼠雜交瘤細胞株；JF-CD4-2-1D8小鼠雜交瘤細胞株；JF-CD4-1-2AGATA結合蛋白4(GATA4)ELISA試劑盒GATA結合蛋白3(GATA3)EL

一、細胞基本屬性

 

組織來源：冠狀動脈

種屬來源：兔

細胞簡介：內(nèi)皮細胞層是血液和其它組織的天然屏障。內(nèi)皮細胞功能病變是造成動脈粥樣硬化的主要原因。內(nèi)皮細胞同時會合成和分泌凝血和纖維蛋白溶解系統(tǒng)的增強和抑制物，以及影響血小板粘附和聚集的媒介物。它們同時也會分泌控制細胞增殖的蛋白來維持血管壁的健康。

人內(nèi)皮細胞會分泌t-PA和PAI-1等抗血栓因子以及響應TNF-α，繼而分泌細胞因子GM-CSF，表達ICAM-1表面抗體，產(chǎn)生大量的一氧化氮和endothelin。經(jīng)皮冠狀動脈腔內(nèi)成形術（PTCA）造成的內(nèi)皮細胞受損和功能破壞可能是導致術后動脈再狹窄的重要原因。

培養(yǎng)基：原代內(nèi)皮細胞培養(yǎng)體系

換液頻率:每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態(tài)：上皮樣，多角形細胞

傳代特性：根據(jù)細胞特性

消化液：0.25%胰dan白酶

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

二、細胞培養(yǎng)狀態(tài)

發(fā)貨時發(fā)送細胞電子版照片

三、使用方法

兔冠狀動脈內(nèi)皮細胞是一種貼壁細胞，細胞形態(tài)呈上皮樣，多角形細胞，在技術部標準操作流程下，細胞可傳2-3代；建議您收到細胞后盡快進行相關實驗。

客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作。

1. 取出T25細胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。

2. 貼壁細胞消化

1)吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞一次；

2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化；

3)用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補充新鮮的培養(yǎng)基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；

4)待細胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基。

3. 細胞收貨脫落

1)收集所有細胞懸液，1000rpm，離心5min，保留沉淀；

2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)；消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化；

3)經(jīng)1000rpm，離心5min，丟棄上清，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi)；

4)待細胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預熱)。

5)原瓶內(nèi)貼壁細胞按正常消化處理。

4. 細胞實驗

因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時，需要對實驗器皿進行包被，以增強細胞貼壁性，避免細胞因沒貼好影響實驗；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%），依據(jù)細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。

四、注意事項

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。

2. 在細胞培養(yǎng)過程中，請注意保持無菌操作。

3. 傳代培養(yǎng)過程中，消化時間不宜過長，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài)。

4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和技術部溝通；由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，詳盡告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。

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