操作規(guī)程:
1、在96孔板加入細(xì)胞00μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入00微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入00微升5000~0000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~0μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及00%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成× MTT 溶液。
5、每孔加50μL × MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加50μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×00
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 0%時(shí)的藥物濃度(IC90)
中文名稱:B-Raf抑制劑(B-Raf inhibitor 1)
英文名稱:B-Raf inhibitor 1 產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg 發(fā)貨周期:1~3天 B-Raf inhibitor1是B-Raf抑制劑,對A375細(xì)胞增殖和p-ER的IC50分別為0.31uM和2nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:1093100-40-3 純度:97.76% 分子量:478.94 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
注意事項(xiàng):
1、本試劑盒僅供科學(xué)研究使用,不可用于診斷或治療。
2、螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心,將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底,避免開蓋時(shí)試劑損失。
3、禁止與其他品牌的試劑混用,否則會影響使用效果。
4、樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。
5、最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿,可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并*清除殘留清潔劑。
6、避免皮膚或粘膜與試劑接觸。
7、需長時(shí)間保存可-20℃避光保存。避免反復(fù)凍融,否則將會增加空白吸收,從而影響檢測結(jié)果。最好小劑量分裝,用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光。
8、用培養(yǎng)基或 PBS 來配制待檢測藥物。如果待測藥物有還原性,則測定不含細(xì)胞,僅含有 MTS 的待測藥物溶液在 490 nm處的空白吸光度。如果該吸光度很小,則可以直接加入 MTS ,如果吸光度相對較大,則需要除去培養(yǎng)基,并用新鮮培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次,然后加入新的 100 μl 培養(yǎng)基和 10 μl MTS 進(jìn)行檢測。
9、細(xì)胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細(xì)胞。
10、加 MTS 溶液后孵育時(shí)間的長短根據(jù)細(xì)胞的類型和細(xì)胞的密度等實(shí)驗(yàn)情況而定,對于大多數(shù)情況孵育 1 小時(shí)即可,白細(xì)胞需要培養(yǎng)較長時(shí)間。
11、如果不是使用 96 孔板檢測,MTS 溶液的用量相應(yīng)等比例增加即可。
紅酵母屬Pseudomonas corrugata
嗜熱棲熱菌Achromobacter xylosoxidans
松杉靈芝Pseudomonas putida
釀酒酵母Pseudomonas putida
大腸埃希氏菌Pseudomonas aeruginosa
Lonsdalea quercina subsp. quercinaAlcaligenes faecalis subsp. faecalis
葡萄白腐菌Pseudomonas stutzeri
釀酒酵母Pseudomonas fluorescens
枯斑擬盤多毛孢Pseudomonas fluorescens
尖孢鐮刀菌亞麻?;?/span>Pseudomonas chlororaphis
嗜熱雙歧桿菌嗜熱亞種Pseudomonas stutzeri
嗜堿芽孢桿菌Pseudomonas putida
側(cè)耳Pseudomonas fluorescens
庫爾勒芽孢桿菌Burkholderia pyrrocinia
葡萄座腔菌Achromobacter sp.
白地霉Comamonas testosterone
釀酒酵母Saccharomyces│cerevisiae 質(zhì)量規(guī)格:>98%,Hsp90抑制劑
釀酒酵母Saccharomyces│cerevisiae 質(zhì)量規(guī)格:含量測定
乳乳球菌乳亞種Lactococcus│lactis subsp.lactis 質(zhì)量規(guī)格:鑒別
B-Raf抑制劑(B-Raf inhibitor 1)L-谷
其他L-α-基戊二;L-2-基戊二;L-麩
英文名稱:L-Glutamic acid
其他英文名稱:L-α-Amino-pentanedioic acid;(S)-2-Aminoglutaric acid
產(chǎn)品規(guī)格:BR,99%
包裝:100克/1公斤
CAS號:56-86-0
C5H9NO4=147.13
級別:BR
含量:≥99.0%
比旋光度:+31.5~+32.5o
PH:3.0~3.5
氯化物:≤0.02%
銨鹽:≤0.02%
硫鹽:≤0.02%
重金屬:≤10ppm
砷鹽:≤1ppm
鐵鹽:≤10ppm
干燥失重:≤0.10%
性狀:無色晶體或結(jié)晶性粉末。200℃開始升華,247~249℃分解。溶于水(G/L),25℃為 8.64,50℃為21.86,75℃為55.32,100℃為140.00,不溶于甲、乙、和冷冰乙。相對密度(d204)1.538。
用途:生化研究
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