培養(yǎng)操作步驟:
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
產(chǎn)品屬于:
商品介紹:
英文名稱:Vps34-IN-1 產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg Vps34-IN-1是Vps34的抑制劑,來自WO/2012085815A1,化合物實(shí)例16a;IC50值為4nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):1383716-33-3 純度:99.64% 分子式:C??H??ClN?O 分子量:425.91 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大?。?/span>
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
松樹土類芽孢桿菌核基質(zhì)p84蛋白抗體Human Sprr2i ELISA Kit大鼠蛋白激C(PKC)免疫試劑盒
大腸埃希氏菌組蛋白H3樣抗體Human SPR ELISA Kit大鼠蛋白激C epsilon(PKCε)免疫試劑盒
博斯氏菌屬組蛋白H3樣抗體Human SRBD1 ELISA Kit大鼠蛋白激B(PKB)免疫試劑盒
芽孢桿菌屬聚組抗體標(biāo)簽抗體Human SPRR3 ELISA Kit大鼠彈性蛋白(ELN)免疫試劑盒
剛毛絲毛伏革菌艾滋病病抗體Human SPRY2 ELISA Kit大鼠彈力蛋白免疫試劑盒
吉氏根瘤菌艾滋病病-1包膜糖蛋白抗體Human SPRY3 ELISA Kit大鼠膽囊收縮/腸促胰肽(CCK)免疫試劑盒
微球菌屬艾滋病病抗體Human SPATS2L ELISA Kit大鼠膽堿乙酰轉(zhuǎn)移(ChAT)免疫試劑盒
小托柄鵝膏菌艾滋病病-1包膜糖蛋白抗體Human SPRY4 ELISA Kit大鼠膽固酯轉(zhuǎn)移蛋白(CETP)免疫試劑盒
阿魏側(cè)耳磷化組蛋白H3抗體Human SPRYD5 ELISA Kit大鼠膽固24S-羥化(CYP46)免疫試劑盒
大腸桿菌短鏈L-3羥烷基脫氫抗體(小鼠,大鼠)Human MYOG(Myogenin) ELISA Kit大鼠膽固(CH)免疫試劑盒
巴斯德酵母同源盒蛋白HOXD10抗體Human SPTLC2 ELISA Kit大鼠單核趨化蛋白4(MCP-4)免疫試劑盒
彎曲高溫單孢菌HHIP樣蛋白1抗體Human SPCS1 ELISA Kit大鼠單核趨化蛋白3(MCP-3/CCL7)免疫試劑盒
桑莖點(diǎn)霉HOXA10抗體Human SPRED2 ELISA Kit大鼠單核趨化蛋白2(MCP-2/CCL8)免疫試劑盒
南方異擔(dān)子菌促黃體生成受體抗體Human SPRR1B ELISA Kit大鼠單核趨化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)免疫試劑盒
煙曲霉HER2受體抗體(N端)Human SPZ1 ELISA Kit大鼠單氧化(MAO)免疫試劑盒
灰平鏈霉菌HER2受體抗體Human SPRR2D ELISA Kit大鼠大內(nèi)皮1免疫試劑盒
青霉菌屬菌種Penicillium│sp. 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品路路通
毛木耳Auricularia│polytricha 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品胡麻屬苷
鹽單胞菌Halomonas│sp. 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,>99.5%(GC)次野鳶尾黃
Vps34抑制劑(Vps34-IN-1)磷二鈉
其他 磷酯二鈉鹽;基磷二鈉鹽;磷一酯二鈉鹽;磷基二鈉
英文名稱: Disodium phenyl phosphate hydrate
其他英文名稱: Phenyl phosphate disodium salt hydrate
產(chǎn)品規(guī)格: CP,85%
包 裝: 25克
CAS號(hào):3279-54-7
C6H5Na2O4P•xH2O=218.06(anhy)
級(jí)別:CP
含量:≥85.0%
水溶解實(shí)驗(yàn):合格
游離酚:合格
奶計(jì)適宜度試驗(yàn):合格
干燥失重:≤16%
磷氫二鈉:≤2.0%
性狀:結(jié)晶性粉末。易吸濕。易溶于水,微溶于乙和。商品也有含二分子結(jié)晶水的
用途:生化研究。測定乳中磷和金阿姆斯特朗(KingArmstrong)磷酯。鈣沉淀劑
保存:2~8℃