培養(yǎng)操作步驟:
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
產(chǎn)品屬于:
商品介紹:
英文名稱:A-1155463 產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg A-1155463是高效選擇性的BCL-XL抑制劑,在Molt-4細(xì)胞中的EC50值為70nM。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:1235034-55-5 純度:98.01% 分子式:C??H??FN?O?S? 分子量:669.79 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大?。?/span>
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
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大腸埃希氏桿菌流感病H3N2血凝抗體Human SNX19 ELISA Kit大鼠白三烯D4(LTD4)免疫試劑盒
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釀酒酵母高密度脂蛋白抗體Human SNUPN ELISA Kit大鼠白介4(IL-4)免疫試劑盒
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大腸埃希氏菌羥基類固脫氫3α抗體Human SNX17 ELISA Kit大鼠白介33(IL-33)免疫試劑盒
脆弱鏈霉菌Streptomyces│fragilis 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,用于環(huán)境分析,>99.0%(GC)N-基野靛堿
: SK520/61資源名稱: 彭納茲沙門氏菌 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.5%(GC)環(huán)氧澤瀉烯
鏈霉菌屬Streptomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.5%白蠟樹
BCL-XL抑制劑(A-1155463)鄰硝基-β-D-吡喃葡萄糖苷
其他2-硝基-β-D-吡喃葡萄糖苷
英文名稱:ONPG
其他英文名稱:2-Nitrophenyl β-D-glucopyranoside;o-Nitrophenyl β-D-glucopyranoside
產(chǎn)品規(guī)格:生物技術(shù)級,98%
包裝:1克
CAS號:2816-24-2
C12H15NO8=301.25
級別:BioChemika
含量:≥99.0%
比旋光度:?105±2°(c = 2% in H2O)
性狀:淡黃色粉末,溶于水:200mg/4ml
用途:生化研究。β-葡萄糖苷底物
保存:?20°C