操作規(guī)程:
1、在96孔板加入細(xì)胞00μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入00微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入00微升5000~0000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~0μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及00%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成× MTT 溶液。
5、每孔加50μL × MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加50μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×00
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 0%時(shí)的藥物濃度(IC90)
中文名稱(chēng):Cisplatin (DNA交聯(lián)劑/細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)劑)
英文名稱(chēng):Cisplatin 產(chǎn)品規(guī)格:50mg Cisplatin 是一種無(wú)機(jī)的水溶性的鉑配合物,通過(guò)形成DNA 交聯(lián)劑抑制DNA 合成。 Cisplatin 通過(guò)與DNA 相互作用形成DNA 交聯(lián)劑誘導(dǎo)細(xì)胞毒性,激活多條信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路, 包括Erk, p53, p73, 和MAPK,其中對(duì)激活凋亡影響大。Cisplatin (30 mM)處理HeLa 細(xì)胞6小時(shí),顯著激活Erk,持續(xù)到隨后的14個(gè)小時(shí)期間。Cisplatin 還具有有效的抗腫瘤活性,誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞死亡。Cisplatin 可引起腎小管上皮細(xì)胞(RPTC)發(fā)生細(xì)胞凋亡,引起細(xì)胞收縮,使caspase 3活性提高50倍,磷脂酰絲氨酸外翻提高4倍,染色質(zhì)凝集和DNA 倍性分別提高5 和15倍。Cisplatin (800 μM)處理RPTC 4個(gè)小時(shí),產(chǎn)生細(xì)胞壞死的典型特征。 別名:cisplatinum, CDDP, Platinol and Platinol-AQ CAS:15663-27-1 分子式:Cl2H6N2Pt 分子量:300.05 儲(chǔ)存:-20℃,有效期36個(gè)月 |
注意事項(xiàng):
1、本試劑盒僅供科學(xué)研究使用,不可用于診斷或治療。
2、螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開(kāi)蓋前請(qǐng)短暫離心,將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底,避免開(kāi)蓋時(shí)試劑損失。
3、禁止與其他品牌的試劑混用,否則會(huì)影響使用效果。
4、樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。
5、最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿,可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并*清除殘留清潔劑。
6、避免皮膚或粘膜與試劑接觸。
7、需長(zhǎng)時(shí)間保存可-20℃避光保存。避免反復(fù)凍融,否則將會(huì)增加空白吸收,從而影響檢測(cè)結(jié)果。最好小劑量分裝,用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光。
8、用培養(yǎng)基或 PBS 來(lái)配制待檢測(cè)藥物。如果待測(cè)藥物有還原性,則測(cè)定不含細(xì)胞,僅含有 MTS 的待測(cè)藥物溶液在 490 nm處的空白吸光度。如果該吸光度很小,則可以直接加入 MTS ,如果吸光度相對(duì)較大,則需要除去培養(yǎng)基,并用新鮮培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次,然后加入新的 100 μl 培養(yǎng)基和 10 μl MTS 進(jìn)行檢測(cè)。
9、細(xì)胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細(xì)胞。
10、加 MTS 溶液后孵育時(shí)間的長(zhǎng)短根據(jù)細(xì)胞的類(lèi)型和細(xì)胞的密度等實(shí)驗(yàn)情況而定,對(duì)于大多數(shù)情況孵育 1 小時(shí)即可,白細(xì)胞需要培養(yǎng)較長(zhǎng)時(shí)間。
11、如果不是使用 96 孔板檢測(cè),MTS 溶液的用量相應(yīng)等比例增加即可。
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熱帶假絲酵母Candida│tropicalis 質(zhì)量規(guī)格:>95%,BRQ熱科克斯體1試劑盒輪環(huán)藤堿
刺囊殼Ascotricha│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>50%,BSP選擇試劑盒羅紅霉
匍枝根霉(黑根霉)Rhizopus│stolonifer 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BRP物質(zhì)受體試劑盒雷公藤吉堿
Cisplatin (DNA交聯(lián)劑/細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)劑)葡聚糖T40
其他葡聚糖D40;右旋糖酐40
英文名稱(chēng):Dextran T40
其他英文名稱(chēng):Mucrose;Glucose polymer
產(chǎn)品規(guī)格:BR,分子量4萬(wàn)
包裝:10克/100克/500克
CAS號(hào):9004-54-0
分子式:(C6H10O5) n
分子量:~40000
級(jí)別:BR
鑒別:呈正反應(yīng)
氯化物:≤0.1%
干燥失重:≤7.0%
重金屬:≤10ppm
性狀:粉末,不溶于乙,在中性溶液中很穩(wěn)定,遇強(qiáng)及升高溫度下被水解,在堿性溶液中端基能被氧化。易溶于水。無(wú)臭,無(wú)味。其溶液可在100-115℃熱壓30-45min。葡聚糖存在于某些微生物生長(zhǎng)過(guò)程中分泌的粘液中。主要由D葡萄喃糖以α,1→鍵連接,支鏈點(diǎn)有1-→2,1→3,1→4連接。隨著微生物種類(lèi)和生長(zhǎng)條件的不同,其結(jié)構(gòu)也有差別
用途:生化研究。細(xì)胞研究,沉淀反應(yīng),從全血中分離白細(xì)胞。學(xué)研究。滲透性研究。惰性膠體已占容積和生物細(xì)胞壁體積的測(cè)定。
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