培養(yǎng)操作步驟:
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
產(chǎn)品屬于:
商品介紹:
英文名稱:SU 5402 產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg SU5402是一種有效的多靶點(diǎn)受體酪氨酸激酶抑制劑,作用于VEGFR2,F(xiàn)GFR1和PDGFRβ,IC50分別為20nM,30nM和510nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):215543-92-3 純度:99.23% 分子式:C??H??N?O? 分子量:296.32 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大?。?/span>
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
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溶血性曼氏桿菌透明質(zhì)2/玻璃2抗體Human SLC25A22 ELISA Kit大鼠P物質(zhì)(SP)免疫試劑盒
炭疽芽孢桿菌Bacillus│anthracis 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,99.5%長春質(zhì)堿
矩圓黑盤孢Melanconium│oblongum Berk. 質(zhì)量規(guī)格:100μg/ml,u=3%文多靈
淡紫擬青霉Paecilomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格:10μg/ml,u=6%(R型)原人參二
多靶點(diǎn)受體酪氨酸激酶抑制劑(SU 5402)鄰聯(lián)甲胺
其他基二甲基聯(lián);4,4′-二基-3,3′-二甲基聯(lián);3,3’-二甲基-4,4’-二基聯(lián);鄰二基二甲基聯(lián);托力丁倍司
英文名稱:DMB
其他英文名稱:3,3'-Dimethylbenzidine;o-Tolidine;3,3'-Dimethylbiphenyl-4,4'-diamine;C.I. 37230;Azoic diazo component 113;Fast Dark Blue Base R
產(chǎn)品規(guī)格:AR,99%
包裝:25克/500克
CAS號(hào):119-93-7
C14H16N2=212.29
級(jí)別:AR
含量:≥99%
氯化物:≤0.01%
硫鹽:≤0.01%
重金屬:≤10ppm
用途:生化研究。生物染色劑,如神經(jīng)組織、膠質(zhì)、血液、螺旋體染色
保存:RT,避光。保質(zhì)期5年