培養(yǎng)操作步驟:
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
產(chǎn)品屬于:
商品介紹:
AZM475271是Src激酶高效選擇性抑制劑,IC50值為5nM,對Flt3、KDR和Tie-2抑制劑弱(IC50>10uM)。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:476159-98-5 別名:M475271 純度:99.19% 分子量:442.94 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大?。?/span>
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
裂褶菌Halomonas sp.
大腸埃希氏菌Marinobacter sp.
擬莖點霉Corynebacterium ammoniagenes
細孢毛霉Microbacterium sp.
銅綠假單胞菌Halorubrum sp.
茶樹菇Halorubrum californiensis
乳桿菌屬Halorubrum sp.
Pilidium concavumHalorubrum sp.
沼澤紅菇Halorubrum sp.
UNNASH/DF-1 Flavobacterium cheniae
菌褶輪枝菌Enterococcus hirae
金黃硬皮馬勃Lactobacillus plantarum
熒光假單胞Flavobacterium sp.
玫煙色棒束孢Halomonas xianhensis
鏈霉菌Rhodococcus qingshengii
微黃原小單孢菌Sphingobacterium siyangensis
類芽孢桿菌Paenibacillus│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>97%,BR
核盤菌Sclerotinia│sclerotiorum 質(zhì)量規(guī)格:UV法含量測定
黑曲霉Aspergillus│niger 質(zhì)量規(guī)格:>98%(T),標準品
Src激酶抑制劑(AZM475271)L-阿拉伯樹膠糖
其他L-阿糖;L-樹膠糖;貝他米松-21-酯;L-阿拉伯糖;L-(-)-阿糖;L-(-)-阿拉伯糖
英文名稱:L-(-)-Arabitol
其他英文名稱:L-Arabinitol
產(chǎn)品規(guī)格:BR
包裝:1克/5克/25克/100克
CAS號:7643-75-6
C5H12O5=152.15
級別:BR
含量:≥98%
重金屬:≤10ppm
性狀:粉末。溶于水、90%乙
用途:生化研究。
保存:RT
保存:2~8℃