培養(yǎng)操作步驟:
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
產(chǎn)品屬于:
商品介紹:
GSK2110183hydrochloride是一個(gè)有效的,ATP競(jìng)爭(zhēng)性的選擇性Akt廣譜抑制劑,作用于Akt1/Akt2/Akt3,Ki值分別為0.08/2/2.6nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 純度:99.49% 分子量:481.77 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
炭角菌*Marinobacter vinifirmus
殺鮭氣單胞菌Pseudoalteromonas atlantica
*豬苓Pseudomonas pachastrellae
芬氏鏈霉菌Pseudomonas pachastrellae
毛柄金錢菌(金針菇)Pseudomonas pachastrellae
瓊斯氏菌Marinobacter vinifirmus
赤紅球菌Pseudoalteromonas atlantica
多殺性巴氏桿菌Pseudoalteromonas atlantica
施氏假單胞菌Pseudoalteromonas atlantica
SphingomonasPseudoalteromonas mariniglutinosa
金色鏈霉菌Pseudoalteromonas atlantica
大腸埃希菌Erythrobacter vulgaris
芽孢桿菌屬Bacillus hwajinpoensis
附球狀暗殼孢Bacillus sp.
黑森新鞘菌Halobacillus sp.
產(chǎn)二鏈霉菌Halobacillus yeomjeoni
豬胰島原(PI)免疫試劑盒小腦脊髓共濟(jì)失調(diào)蛋白3抗體人淋巴β(LTB)ELISA試劑盒 白藜蘆-4'-甲
豬胰島樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白3(IGFBP-3)免疫試劑盒ASTE1蛋白抗體人淋巴β(LTB)ELISA試劑盒 白藜蘆三芐
豬胰島樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白1(IGFBP-1)免疫試劑盒磷化自噬相關(guān)蛋白4B抗體人淋巴α(LTA)ELISA試劑盒 白藜蘆三甲
豬胰島樣生長(zhǎng)因子2(IGF-2)免疫試劑盒微絲相關(guān)蛋白1抗體人淋巴α(LTA)ELISA試劑盒 白麻苷
Akt抑制劑(GSK2110183 hydrochloride)FMOC-L-甲硫
其他N-芴甲氧羰基-L-甲硫;Fmoc-L-蛋;N-(9-芴甲氧羰基)-L-蛋
英文名稱:Fmoc-Met-OH
其他英文名稱:Fmoc-L-methionine;N-(9-Fluorenylmethoxycarbonyl)-L-methionine
產(chǎn)品規(guī)格:特純,98%
包裝:5克/25克/100克/500克
CAS號(hào):71989-28-1
C20H21NO4S=371.45
級(jí)別:Purum
含量:≥98.0%
熔點(diǎn):127~133℃
比旋光度:-29.1±3°(C=1,DMF)
性狀:結(jié)晶粉末
用途:生化研究。多肽合成
保存:2~8℃