培養(yǎng)操作步驟:
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
產(chǎn)品屬于:
商品介紹:
B-Raf IN1是B-Raf和c-Raf抑制劑,IC50分別為24nM和25nM。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:950736-05-7 分子量:515.53 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大?。?/span>
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
小鼠Ⅱ型膠原C端肽(CTX-Ⅱ)免疫試劑盒BTB/POZ結(jié)構(gòu)域蛋白7抗體人丁型肝炎IgM(HDV IgM)ELISA試劑盒突厥烯
小鼠Ⅱ型膠原(Col Ⅱ)免疫試劑盒腦特異性血管生成抑制蛋白1抗體人丁型肝炎IgM(HDV IgM)ELISA試劑盒土貝母苷
小鼠25羥基維生D3(25 HVD3)免疫試劑盒Bcl2相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子抗體人丁型肝炎IgG(HDV IgG)ELISA試劑盒土貝母苷甲
小鼠25羥基膽固(25-OHC)免疫試劑盒腦環(huán)核苷門控通道蛋白1抗體人丁型肝炎IgG(HDV IgG)ELISA試劑盒土貝母苷乙
B-Raf和c-Raf抑制劑(B-Raf IN 1)5-胞苷一磷二鈉鹽
其他胞苷-5′-單磷二鈉鹽;胞啶-5'-單磷二鈉鹽;5'-磷胞嘧啶核苷二鈉;可尼定-5'-單磷鹽二鈉;5ˊ-一磷胞啶二鈉鹽;5ˊ-一磷胞苷二鈉鹽;胞苷鈉;胞嘧啶核糖5ˊ-一磷二鈉鹽
英文名稱:5′-CMP,2Na
其他英文名稱:Cytidine 5′-monophosphate disodium salt;C-5′-P
產(chǎn)品規(guī)格:高純,98%
包 裝: 1克/5克/25克/100克
CAS號:6757-06-8
C9H12N3O8PNa2=367.16
級別:High purity grade
用途:生化研究
保存:-20℃