培養(yǎng)操作步驟:
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
產(chǎn)品屬于:
商品介紹:
CRT0066101dihydrochloride是有效,選擇性的PKD抑制劑,對(duì)PKD1,2和3的IC50值分別為1,2.5和2nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):1883545-60-5 純度:98.94% 分子量:374.87 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大?。?/span>
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
枯草芽胞桿菌Pichia farinosa
空泡單胞菌Sporobolomyces foliicola
球孢白僵菌Debaryomyces hansenii var. fabryi
長(zhǎng)枝木霉Pichia fermentans
釀酒酵母Williopsis californica
大腸埃希菌Hanseniaspora opuntiae
多主葡萄殼菌Pichia anomala
貪噬菌Pichia membranifaciens
貝氏不動(dòng)桿菌Pichia membranifaciens
綠青鏈霉菌Pichia membranifaciens
黃色長(zhǎng)孢鏈霉菌Pichia membranifaciens
香菇Pichia membranifaciens
黃曲霉Pichia membranifaciens
茄鏈格孢Pichia membranifaciens
桔橙鏈霉菌Pichia membranifaciens
德氏乳桿菌保加利亞亞種Pichia membranifaciens
小鼠活化蛋白C(APC)免疫試劑盒β淀粉樣肽 1-40(C端)抗體人抗巨噬抗體(anti-macrophage Ab)ELISA試劑盒 莫諾宗
小鼠黃體生成(LH)免疫試劑盒β-抑制蛋白2抗體/β休止蛋白2/β-arrestin抗體人抗巨噬抗體(anti-macrophage Ab)ELISA試劑盒 莫諾苷
小鼠環(huán)磷腺苷(cAMP)免疫試劑盒炭疽桿菌抗體人抗甲狀腺過(guò)氧化物抗體(TPO-Ab)ELISA試劑盒 牡丹皮苷C
小鼠環(huán)磷鳥苷(cGMP)免疫試劑盒腎上腺皮質(zhì)發(fā)育異常蛋白抗體人抗甲狀腺過(guò)氧化物抗體(TPO-Ab)ELISA試劑盒 牡荊內(nèi)酯
PKD抑制劑(CRT0066101 dihydrochloride)BOC-L-色
其他N-叔丁氧羰基-L-色
英文名稱:BOC-L-Tryptophan
其他英文名稱:Boc-Trp-OH;Nα-(tert-Butoxycarbonyl)-L-tryptophan
產(chǎn)品規(guī)格:BR,99%
包裝:5克/25克/100克/500克
CAS號(hào):13139-14-5
C16H20N2O4= 304.35
含量:≥99.0%
熔點(diǎn):~138 °C
比旋光度:-19~-21° (c=1, DMF)
300MHz 1H:與標(biāo)樣一致
性狀:結(jié)晶或結(jié)晶性粉末
用途:生化研究。多肽合成
保存:RT,避光