培養(yǎng)操作步驟:
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
產(chǎn)品屬于:
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
HAA抑制劑(MKC9989) | MKC9989 | 1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|50mg|100mg | 1~3天 |
商品介紹:
MKC9989是一種HAA抑制劑,且能抑制IRE1α其IC50值在0.23μM至44μM的范圍之間。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):1338934-20-5 純度:98.01% 分子量:336.34 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
豚鼠血管緊張Ⅱ(ANG-Ⅱ)免疫試劑盒B淋巴淋巴瘤因子9抗體人鈣調(diào)(CAM)ELISA試劑盒 王不留行黃苷
豚鼠纖溶抗纖溶復(fù)合物(PAP)免疫試劑盒膽綠還原抗體人鈣調(diào)(CAM)ELISA試劑盒 維生A
豚鼠晚期糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)免疫試劑盒BIVM蛋白抗體人真胰島(TI)ELISA試劑盒 維生A醋酯
豚鼠嗜性粒陽離子蛋白(ECP)免疫試劑盒血型Lewis A抗原抗體人真胰島(TI)ELISA試劑盒 維生A
HAA抑制劑(MKC9989)5′-腺苷一磷
其他5′-腺苷;腺苷-5′-單磷;腺苷-5′-磷;5′-磷腺苷;5'-腺嘌呤核苷;5'-腺嘌呤核甙;5-單磷腺苷
英文名稱:5′-AMP
其他英文名稱:Adenosine-5′-Monpohosphate;5'-Adenylic acid;Adenosine-5'-monophosphoric acid
產(chǎn)品規(guī)格:高純,95%
包 裝: 1克/5克/25克/100克
CAS號(hào):61-19-8
C10H14N5O7P=347.22
級(jí)別:High purity grade
含量:≥95.0%(HPLC)
A250/A260:0.79~0.90
A280/A260:0.18~0.22
Em (258nm, Phosphate Buffer, pH 7.0):>11000
重金屬:≤0.002%
性狀:結(jié)晶粉末
用途:生化研究
保存:2~8℃