小鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞的相關(guān)產(chǎn)品：小鼠小腸平滑肌細(xì)胞大鼠肺成纖維細(xì)胞大鼠肺巨噬細(xì)胞大鼠肺微血管周細(xì)胞大鼠心肌細(xì)胞大鼠心房心肌細(xì)胞大鼠心室心肌細(xì)胞大鼠心肌成纖維細(xì)胞大鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞大鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞大鼠主動(dòng)脈外膜成纖維細(xì)胞大鼠冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞大鼠冠狀動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞大鼠大隱靜脈內(nèi)皮細(xì)胞大鼠頸動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞

小鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞

一、細(xì)胞基本屬性

 

培養(yǎng)基：含B-27 Supplement、Penicillin、Streptomycin等

包被條件：PLL(0.1mg/ml)

傳代特性：屬于終末分化細(xì)胞；屬于不增殖細(xì)胞群

消化液：0.25%胰dan白酶

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

傳代比例：1:2

細(xì)胞簡(jiǎn)介：小鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞分離自海馬體；海馬體(Hippocampus)，又名海馬回、海馬區(qū)、大腦海馬，海馬體主要負(fù)責(zé)記憶和學(xué)習(xí)。海馬神經(jīng)元細(xì)胞是海馬區(qū)的主要細(xì)胞組成，主要功能是參與近期記憶、情緒及內(nèi)臟功能調(diào)節(jié)、是老年性癡呆、癲癇等疾病的主要病灶之一。海馬屬于大腦的邊緣系統(tǒng)，在學(xué)習(xí)、記憶、情緒反應(yīng)及神經(jīng)系統(tǒng)疾病的病理生理變化等方面有重要作用，而且海馬組織是中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)主要的神經(jīng)干細(xì)胞聚集區(qū)，具有高度序化板層結(jié)構(gòu)和神經(jīng)元相對(duì)獨(dú)立分布的特點(diǎn)，境界相對(duì)清晰，便于取材，因此，海馬神經(jīng)元體外培養(yǎng)模型被廣大基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)和臨床醫(yī)學(xué)研究者當(dāng)做理想的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?。海馬神經(jīng)元細(xì)胞培養(yǎng)是研究神經(jīng)細(xì)胞生物學(xué)特性和外源干擾因素作用(細(xì)胞因子)的有效細(xì)胞模型，其在神經(jīng)生物學(xué)，發(fā)育生物學(xué)體外實(shí)驗(yàn)研究中已被廣泛應(yīng)用。
原代細(xì)胞分離培養(yǎng)的思路：

取材--分離--培養(yǎng)--鑒定

首先將組織從機(jī)體中取出，經(jīng)胰dan白酶/膠原酶處理后分散成單細(xì)胞，再在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使細(xì)胞繁殖到一定系數(shù)后進(jìn)行細(xì)胞鑒定。

實(shí)驗(yàn)步驟：

一、取7-10d雄性SD大鼠，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min。

二、在超凈工作臺(tái)中，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中，去除小腦和間腦。

三、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動(dòng)以去除軟腦膜和腦膜大血管，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中。

四、用細(xì)解剖鑷去除大腦白質(zhì)、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質(zhì)。

五、大腦皮質(zhì)放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小，放入50ml的離心管中，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶，0 .025-0 .05％IV型膠原酶，200-400U DNaseI)，混勻后37℃水浴消化1-1.5h。

六、室溫1 000×g離心8min，去上清液。

七、沉淀中加入20％BSA重懸浮，充分混勻，1 000×g，20min，4℃離心，去上清。

八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶，0.05-0.1％I型膠原酶，100-300U DNaseI )重懸浮，混勻，37℃水浴消化0.5-1h，700×g室溫離心6min，去上清液。

九、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g，60min，4℃)，1000×g，4℃離心10min。

十、靠近底部的紅細(xì)胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段，吸出后DMEM漂洗兩次(離心1000×rpm，6min，室溫)，去上清液。

加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS，4ug/ml素 )重懸浮，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細(xì)胞培養(yǎng)皿中，置于37℃、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含素的混合培養(yǎng)基，隨后隔天換液。

注意事項(xiàng)：

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個(gè)月。

2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，請(qǐng)注意保持無(wú)菌操作。

3. 傳代培養(yǎng)過程中，yi酶消化時(shí)間不宜過長(zhǎng)，否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長(zhǎng)狀態(tài)。

4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和技術(shù)部溝通；由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，詳盡告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。
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