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詳細介紹
一、細胞基本屬性
細胞名稱 | 人增生性瘢痕成纖維細胞 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 |
商品貨號 | A01X1435 |
實驗步驟：
一、取7-10d雄性SD大鼠，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min。
二、在超凈工作臺中，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中，去除小腦和間腦。
三、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管，再放在新的盛有預冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中。
四、用細解剖鑷去除大腦白質(zhì)、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質(zhì)。
五、大腦皮質(zhì)放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小，放入50ml的離心管中，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶，0 .025-0 .05％IV型膠原酶，200-400U DNaseI)，混勻后37℃水浴消化1-1.5h。
六、室溫1 000×g離心8min，去上清液。
七、沉淀中加入20％BSA重懸浮，充分混勻，1 000×g，20min，4℃離心，去上清。
八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶，0.05-0.1％I型膠原酶，100-300U DNaseI )重懸浮，混勻，37℃水浴消化0.5-1h，700×g室溫離心6min，去上清液。
九、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g，60min，4℃)，1000×g，4℃離心10min。
十、靠近底部的紅細胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段，吸出后DMEM漂洗兩次(離心1000×rpm，6min，室溫)，去上清液。
加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS，4ug/ml素 )重懸浮，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細胞培養(yǎng)皿中，置于37℃、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含素的混合培養(yǎng)基，隨后隔天換液。
注意事項：
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。
2. 在細胞培養(yǎng)過程中，請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過程中，yi酶消化時間不宜過長，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和技術部溝通；由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，詳盡告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。
原代細胞分離培養(yǎng)的思路：
取材--分離--培養(yǎng)--鑒定
首先將組織從機體中取出，經(jīng)胰dan白酶/膠原酶處理后分散成單細胞，再在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使細胞繁殖到一定系數(shù)后進行細胞鑒定。
公司正在出售的產(chǎn)品：
大鼠顳下頜關節(jié)軟骨細胞 | 兔破骨細胞 |
神經(jīng)性舞蹈病蛋白重組兔單克隆抗體 | PE標記的核苷交換因子樣蛋白1抗體 |
大鼠腸間質(zhì)細胞 | PE標記的嗜性粒細胞陽離子型核糖核5抗體 |
大鼠腸成纖維細胞 | PE標記的卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白85B抗體 |
大鼠毛囊干細胞 | PE標記的磷化絲裂原活化蛋白激MAP4K4抗體 |
兔睪丸支持細胞 | PE標記的鈉鈣交換蛋白1抗體 |
大鼠原代胸腺成纖維細胞 | PE標記的DLX4抗體 |
兔視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細胞 | PE標記的線粒體核糖體蛋白S17抗體 |
人脂肪微血管內(nèi)皮細胞 | PE標記的白介-23受體抗體 |
兔皮膚成纖維細胞 | PE標記的生長分化因子1抗體 |
兔下丘腦神經(jīng)元細胞 | PE標記的NDUFB1蛋白抗體 |
小鼠心肌細胞(胎鼠） | 人增生性瘢痕成纖維細胞PE標記的巨核細胞刺激因子/蛋白多糖4/淺表層粘膜蛋白多糖抗體 |
兔視網(wǎng)膜muller細胞 | PE標記的天冬氨-胱氨特異性蛋白家族抗體 |
兔腦動脈血管內(nèi)皮細胞 | PE標記的磷化肌細胞增強因子2抗體 |
大鼠原代頸動脈平滑肌細胞 | PE標記的T淋巴細胞負調(diào)節(jié)蛋白抗體 |
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