大鼠真皮毛乳頭細(xì)胞公司正在出售的產(chǎn)品：人支氣管上皮細(xì)胞，HBECTR細(xì)胞人直腸成纖維細(xì)胞，HRFCP細(xì)胞人子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞人子宮平滑肌細(xì)胞兔Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞兔B淋巴細(xì)胞兔DC細(xì)胞血管內(nèi)皮生長因子165(VEGF165)ELISA試劑盒血管內(nèi)皮生長因子145(VEGF145)ELISA試劑盒血管內(nèi)皮鈣黏蛋白(CDH5)ELISA試劑盒血管緊張Ⅲ(AngⅢ)ELISA試劑盒血管緊張Ⅱ受體2(AGTR2

一、細(xì)胞基本屬性

 

組織來源：皮膚組織

種屬來源：大鼠

細(xì)胞簡介：真皮毛乳頭細(xì)胞位于毛囊基底部 ，是一類成纖維細(xì)胞。在毛囊發(fā)育早期 ，真皮細(xì) 胞向單層上皮細(xì)胞發(fā)出第一真皮信號 ，刺激上皮局部形成毛基板。  隨后毛基板細(xì) 胞向下方的真皮發(fā)出第一表皮信號 ，誘導(dǎo)其形成有成纖維細(xì)胞組成的凝集細(xì)胞團(tuán) 。在此過程中 ，毛母質(zhì)細(xì)胞逐漸包裹凝集細(xì)胞團(tuán) ，形成成熟的真皮毛乳頭細(xì)胞。 作為毛囊中的重要細(xì)胞群 ，真皮毛乳頭細(xì)胞的分子機(jī)制和臨床應(yīng)用正在被逐漸認(rèn) 識和解析。

培養(yǎng)基：原代成纖維細(xì)胞培養(yǎng)體系

換液頻率:每2-3天換液一次

生長特性：貼壁生長

細(xì)胞形態(tài)：長梭形細(xì)胞

傳代特性：根據(jù)細(xì)胞特性傳代

消化液：0.25%胰dan白酶

培養(yǎng)條件：氣相：空氣 ，95%；  CO2 ，  5%

二、細(xì)胞培養(yǎng)狀態(tài)

發(fā)貨時發(fā)送細(xì)胞電子版照片

三、使用方法

大鼠真皮毛乳頭細(xì)胞是一種貼壁生長細(xì)胞，細(xì)胞形態(tài)呈長梭形細(xì)胞，在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下，細(xì)胞可傳2-3代；建議您收到細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實驗。

客戶收到細(xì)胞后，請按照以下方法進(jìn)行操作。

1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。

2. 貼壁細(xì)胞消化

1)吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次；

2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化；

3)用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補(bǔ)充新鮮的培養(yǎng)基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；

4)待細(xì)胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基。

3. 細(xì)胞收貨脫落

1)收集所有細(xì)胞懸液，1000rpm，離心5min，保留沉淀；

2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)；消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化；

3)經(jīng)1000rpm，離心5min，丟棄上清，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi)；

4)待細(xì)胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預(yù)熱)。

5)原瓶內(nèi)貼壁細(xì)胞按正常消化處理。

4. 細(xì)胞實驗

因原代細(xì)胞貼壁特殊性，貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時，需要對實驗器皿進(jìn)行包被，以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性，避免細(xì)胞因沒貼好影響實驗；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%），依據(jù)細(xì)胞種類而定。懸浮/半懸浮細(xì)胞無需包被。

四、注意事項

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。

2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，請注意保持無菌操作。

3. 傳代培養(yǎng)過程中，消化時間不宜過長，否則會影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài)。

4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和技術(shù)部溝通；由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，詳盡告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。

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