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詳細(xì)介紹
人腎足細(xì)胞
培養(yǎng)基：原代上皮細(xì)胞培養(yǎng)體系
傳代特性：細(xì)胞特性確定傳代
消化液：0.25%胰dan白酶
培養(yǎng)條件：氣相： 空氣，95%；CO2 ，5%
細(xì)胞簡介：腎小球為過濾器，腎小球毛細(xì)血管壁構(gòu)成過濾膜。腎小球過濾膜從內(nèi)到外有 三層結(jié)構(gòu)： 內(nèi)層為內(nèi)皮、中層為腎小球基膜、外層為上皮細(xì)胞層， 上皮細(xì)胞又稱 足細(xì)胞，其不規(guī)則突起稱足突， 其間有許多狹小間隙，血液經(jīng)濾膜過濾后， 濾液 入腎小球囊。在正常情況下，血液中絕大部分蛋白質(zhì)不能濾過而保留于血液中， 僅小分子物質(zhì)如尿素、葡萄糖、電解質(zhì)及某些小分子蛋白能濾過。 腎足細(xì)胞即腎 小球上皮細(xì)胞， 它附著于腎小球基底膜的外側(cè)，連同腎小球基底膜和腎小球基膜 一起構(gòu)成了腎小球血液濾過屏障。又由于正常成年機體的腎臟足細(xì)胞是一種終末 分化細(xì)胞， 體外培養(yǎng)的原代細(xì)胞不能增殖。足細(xì)胞呈星型多突狀， 胞體較大，由 胞體伸出許多突起， 呈指狀交叉覆蓋于腎小球基底膜外表面， 并通過黏附分子和 蛋白多糖分子與腎小球基底膜相連。足細(xì)胞在正常情況下可以分泌腎小球基底膜 的主要組成成分IV型膠原和纖維連接蛋白,在促腎纖維化引資等刺激下還能分泌具 有降解腎小球基底膜作用的基質(zhì)金屬蛋白酶和組織蛋白酶，從而在腎小球基底膜 的代謝平衡中發(fā)揮重要作用。
一、細(xì)胞基本屬性
細(xì)胞名稱 | 人腎足細(xì)胞 | 商品貨號 | A01X1331 |
組織來源 | 腎臟組織 | 種屬來源 | 人 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 | 生長特性 | 貼壁培養(yǎng) |
換液頻率 | 每2-3天換液一次 | 細(xì)胞形態(tài) | 不規(guī)則，含足突細(xì)胞 |
原代細(xì)胞分離培養(yǎng)的思路：
取材--分離--培養(yǎng)--鑒定
首先將組織從機體中取出，經(jīng)胰dan白酶/膠原酶處理后分散成單細(xì)胞，再在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使細(xì)胞繁殖到一定系數(shù)后進(jìn)行細(xì)胞鑒定。
實驗步驟：
一、取7-10d雄性SD大鼠，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min。
二、在超凈工作臺中，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中，去除小腦和間腦。
三、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中。
四、用細(xì)解剖鑷去除大腦白質(zhì)、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質(zhì)。
五、大腦皮質(zhì)放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小，放入50ml的離心管中，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶，0 .025-0 .05％IV型膠原酶，200-400U DNaseI)，混勻后37℃水浴消化1-1.5h。
六、室溫1 000×g離心8min，去上清液。
七、沉淀中加入20％BSA重懸浮，充分混勻，1 000×g，20min，4℃離心，去上清。
八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶，0.05-0.1％I型膠原酶，100-300U DNaseI )重懸浮，混勻，37℃水浴消化0.5-1h，700×g室溫離心6min，去上清液。
九、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g，60min，4℃)，1000×g，4℃離心10min。
十、靠近底部的紅細(xì)胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段，吸出后DMEM漂洗兩次(離心1000×rpm，6min，室溫)，去上清液。
加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS，4ug/ml素 )重懸浮，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細(xì)胞培養(yǎng)皿中，置于37℃、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含素的混合培養(yǎng)基，隨后隔天換液。
公司正在出售的產(chǎn)品：
兔乳腺上皮細(xì)胞 | 兔腦皮層神經(jīng)元細(xì)胞 |
細(xì)胞色c氧化IV亞型1（內(nèi)參）單克隆抗體 | 1號染色體開放閱讀框162抗體 |
大鼠骨髓肥大細(xì)胞 | 1號染色體開放閱讀框172抗體 |
兔髓核細(xì)胞 | 1號染色體開放閱讀框174抗體 |
人神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞 | 1號染色體開放閱讀框180抗體 |
人脈絡(luò)膜成纖維細(xì)胞 | 1號染色體開放閱讀框182抗體 |
兔脾淋巴細(xì)胞 | 1號染色體開放閱讀框185抗體 |
豬腎上腺髓質(zhì)細(xì)胞 | 磷化內(nèi)收蛋白gamma抗體 |
人直腸成纖維細(xì)胞 | 1號染色體開放閱讀框189抗體 |
小鼠鞏膜上皮細(xì)胞 | 1號染色體開放閱讀框198抗體 |
兔甲狀腺上皮細(xì)胞 | 1號染色體開放閱讀框50抗體 |
大鼠主動脈瓣膜間質(zhì)細(xì)胞 | 人腎足細(xì)胞1號染色體開放閱讀框77抗體 |
兔卵巢顆粒細(xì)胞 | 1號染色體開放閱讀框85抗體 |
羊睪丸間質(zhì)細(xì)胞 | 20號染色體開放閱讀框107抗體 |
大鼠食管成纖維細(xì)胞 | 20號染色體開放閱讀框14抗體 |
注意事項：
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。
2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過程中，yi酶消化時間不宜過長，否則會影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和技術(shù)部溝通；由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，詳盡告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。
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