人角膜內(nèi)皮細胞公司正在出售的產(chǎn)品：兔破骨細胞人膽囊成纖維細胞大鼠頸靜脈內(nèi)皮細胞兔淋巴管成纖維細胞大鼠心肌干細胞小鼠頸動脈平滑肌細胞兔腦血管成纖維細胞Collagenase I 猴子膠原IELISA檢測試劑盒ADM 猴子腎上腺髓質(zhì)ELISA檢測試劑盒IL-2R 猴子白介2受體ELISA檢測試劑盒hs-CRP 猴超敏C反應蛋白ELISA檢測試劑盒TGF-β1 犬轉(zhuǎn)移生長因子β1ELISA檢測試劑盒IL

一、細胞基本屬性

 

組織來源：正常眼組織

種屬來源：人

細胞簡介：角膜位于眼球前壁的一層透明膜，約占纖維膜的前1/6，從后面看角膜呈正圓形， 從前面看為橫橢圓形。角膜厚度各部分不同，  中央部最薄。角膜分為五層，  由前 向后依次為：上皮細胞層、前彈力層、基質(zhì)層、后彈力層、內(nèi)皮細胞層。    角膜 內(nèi)皮細胞的體外培養(yǎng)對研究角膜的生理學、病理學、免疫學以及分子生物學都是 極為重要的手段，常用于研究細胞代謝產(chǎn)物、病毒感染、各種生長因子和藥物對 細胞生長的影響。

培養(yǎng)基：原代內(nèi)皮細胞培養(yǎng)體系

換液頻率:每2-3天換液一次

生長特性：貼壁培養(yǎng)

細胞形態(tài)：鋪路石樣，  不規(guī)則細胞

傳代特性：細胞特性確定傳代

消化液：0.25%胰dan白酶

培養(yǎng)條件：氣相：  空氣，95%；CO2 ，5%

二、細胞培養(yǎng)狀態(tài)

發(fā)貨時發(fā)送細胞電子版照片

三、使用方法

人角膜內(nèi)皮細胞是一種貼壁培養(yǎng)細胞，細胞形態(tài)呈鋪路石樣，  不規(guī)則細胞，在技術(shù)部標準操作流程下，細胞可傳2-3代；建議您收到細胞后盡快進行相關(guān)實驗。

客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作。

1. 取出T25細胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。

2. 貼壁細胞消化

1)吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞一次；

2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化；

3)用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補充新鮮的培養(yǎng)基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；

4)待細胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基。

3. 細胞收貨脫落

1)收集所有細胞懸液，1000rpm，離心5min，保留沉淀；

2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)；消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化；

3)經(jīng)1000rpm，離心5min，丟棄上清，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi)；

4)待細胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預熱)。

5)原瓶內(nèi)貼壁細胞按正常消化處理。

4. 細胞實驗

因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時，需要對實驗器皿進行包被，以增強細胞貼壁性，避免細胞因沒貼好影響實驗；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%），依據(jù)細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。

四、注意事項

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。

2. 在細胞培養(yǎng)過程中，請注意保持無菌操作。

3. 傳代培養(yǎng)過程中，消化時間不宜過長，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài)。

4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和技術(shù)部溝通；由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，詳盡告知細胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。

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