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elisa試劑盒要開(kāi)發(fā)新的小分子RNA的提取方法
閱讀:236 發(fā)布時(shí)間:2020-1-3多數(shù)傳統(tǒng)RNA分離試劑盒目的是為回收mRNA 而設(shè)計(jì)的,往往會(huì)棄去較小的RNA分子以減少干擾提高mRNA得率。因此這些步驟會(huì)導(dǎo)致一些小分子RNAs,如微小RNAs的損失。另外,此類(lèi)方法往往涉及酚/lv仿等有毒化學(xué)物質(zhì)的抽提。多數(shù)RNA純化試劑盒采用的標(biāo)準(zhǔn)玻璃纖維濾膜或者硅膠濾膜,不能有效的回收更小的小分子RNA,如微小RNA。
elisa試劑盒由于微小RNA存在的廣泛性和多樣性,提示微小RNA可能有非常廣泛多樣的生物功能。盡管對(duì)微小RNA的研究還處于初級(jí)階段,據(jù)推測(cè)微小RNA在高級(jí)真核生物體內(nèi)對(duì)基因表達(dá)的調(diào)控作用可能和轉(zhuǎn)錄因子一樣重要并可能代表在一個(gè)新發(fā)現(xiàn)的層次上的基因表達(dá)調(diào)控方式。對(duì)一部分微小RNA的研究分析提示微小RNA參與生命過(guò)程中一系列的重要進(jìn)程,包括早期發(fā)育,細(xì)胞增殖,細(xì)胞凋亡,細(xì)胞死亡,脂肪代謝和細(xì)胞分化以及和癌癥的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)??梢?jiàn),對(duì)小分子RNA的研究日益受到重視。然而,進(jìn)行小分子RNA分析的第yi個(gè)關(guān)鍵步驟就是從生物樣本中純化小分子RNAs。
微小RNA的分子量相對(duì)較小,對(duì)于常規(guī)的核酸提取法都不適用。微小RNA只有在乙醇濃度很高的條件下(大于70% )才能與核酸提取柱相結(jié)合,從而得到分離。但在該濃度的乙醇條件下,絕大多數(shù)的其他分子,特別是大分子都會(huì)被沉淀,使分離無(wú)法進(jìn)行。 目前多采用利用毒性很強(qiáng)的酚以及l(fā)v仿等有機(jī)試劑,首先將大分子沉淀除掉,然后純化總的核酸。除了使用的試劑有毒外,大分子的DNA和RNA仍然會(huì)影響對(duì)微小RNA的進(jìn)一步分析。因此,有必要開(kāi)發(fā)新的小分子RNA的提取方法。
elisa試劑盒由于小分子RNA可能參與分化、發(fā)育、組織生長(zhǎng)、脂肪代謝等生理過(guò)程,在不同的組織和發(fā)育階段的表達(dá)水平有所不同,進(jìn)一步了解小分子RNA的生物功能具有重要意義。
微小RNA(microRNA,簡(jiǎn)稱(chēng)miRNA)是生物體內(nèi)源長(zhǎng)度約為20-23個(gè)核苷酸的非編碼單鏈小分子RNA,通過(guò)與靶mRNA的互補(bǔ)配對(duì)而在轉(zhuǎn)錄后水平上對(duì)基因的表達(dá)進(jìn)行負(fù)調(diào)控, 導(dǎo)致mRNA的降解或翻譯抑制。