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牛elisa試劑盒原理：

    采用競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)定牛elisa試劑盒OXLDL水平。用金黃地鼠氧化低密度脂蛋白OXLDL抗原包被微孔板，制成固相載體，實(shí)驗(yàn)時(shí)依次在微孔板中加入標(biāo)本及標(biāo)準(zhǔn)品，并加入HRP標(biāo)記的OXLDL抗體，標(biāo)本及標(biāo)準(zhǔn)品中的抗體和一定量的酶標(biāo)抗體競(jìng)爭(zhēng)與固相抗原結(jié)合。反復(fù)洗滌后加底物TMB顯色。TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化為藍(lán)色，再用硫酸終止反應(yīng)，轉(zhuǎn)變成黃色。標(biāo)本中抗體量越多，結(jié)合在固相上的酶標(biāo)抗體愈少，顏色越淺。顏色的深淺和樣品中的OXLDL含量呈負(fù)相關(guān)。采用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)測(cè)定吸光度（OD值），根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算測(cè)試樣品中OXLDL濃度。

 

牛elisa試劑盒操作流程：

1.即將進(jìn)行試驗(yàn)的版孔進(jìn)行設(shè)定好，規(guī)范品5個(gè)點(diǎn)，每個(gè)點(diǎn)設(shè)定平行，需求用到10個(gè)孔，空白只需1個(gè)孔。剩下孔能夠做為樣本孔

2.稀釋規(guī)范，準(zhǔn)備好5個(gè)EP管，然后在每個(gè)EP管中參加150微升規(guī)范稀釋液，編上編碼，分別為1，2，3，4,5，在1號(hào)管中參加150規(guī)范品，用槍頭重復(fù)吹打10次左右（留意操控起伏不要過(guò)大簡(jiǎn)單發(fā)生氣泡）如果有渦旋儀能夠在渦旋儀上渦旋5秒左右，然后換槍頭，在1號(hào)管中取150微升參加到2號(hào)管，后面進(jìn)程一次類推。終稀釋完，前面4個(gè)管中每管液體在150微升，5號(hào)管為300微升。濃度是從大到小。

3.規(guī)范、樣本、空白加樣：規(guī)范是每個(gè)濃度點(diǎn)2個(gè)孔（做平行），每孔參加50微升，加樣進(jìn)程中留意換槍頭，樣本孔中每孔參加50微升，加樣進(jìn)程中留意換槍頭，空白孔參加50微升蒸餾水。特別要闡明的是，規(guī)范加樣和樣本加樣盡量操控在15分鐘內(nèi)加完，如果時(shí)刻拖的太長(zhǎng)，會(huì)導(dǎo)致前面孔先反響后面孔才開(kāi)端反響，這樣數(shù)值誤差過(guò)大。加完樣后蓋上封板膜，至37攝氏度孵育30分鐘.

4.洗版，在孵育進(jìn)程中能夠?qū)⑾礈煲号浜茫?0ml30倍濃縮洗滌液用蒸餾水或許去離子水定容到600ml即可。每孔參加250-300微升的洗滌液（不要漫過(guò)版孔），（如果有震動(dòng)儀的話，能夠講板子放入震動(dòng)儀上5秒左右，然后靜止三十秒，沒(méi)有請(qǐng)疏忽次進(jìn)程）將板子在桌子上晃動(dòng)5秒左右，然后靜置30秒，甩干，決定。闡明：甩干進(jìn)程盡量要快，1秒內(nèi)就能夠完結(jié)，不要漸漸歪斜倒掉液體，直接翻板甩掉液體即可。決定進(jìn)程需求在桌子上墊一層吸水紙或許濾紙，版孔朝下拍幾下，拍干差異主要看吸水紙和濾紙上沒(méi)有顯著的水漬為完結(jié)。

5.每孔參加50微升的酶標(biāo)試劑，此處在空白孔中不需求加（空白孔為空），孵育30分鐘。

6.洗版同進(jìn)程4

7.顯色，先每孔中參加50微升的顯色A液，然后每孔中參加50微升顯色B液。避光37攝氏度顯色15分鐘

8.停止，每孔參加50微升的停止液，留意，加完停止液必須在15分鐘內(nèi)讀數(shù)，超越時(shí)刻讀數(shù)無(wú)效。在規(guī)則時(shí)刻內(nèi)讀數(shù)都是有用的。

至此，整個(gè)牛elisa試劑盒試驗(yàn)完畢。需求額外提示的是：在做完整個(gè)試驗(yàn)過(guò)儀器之前，儀器預(yù)熱半小時(shí)，這個(gè)計(jì)算好時(shí)刻，也能夠直接將儀器一向開(kāi)著，直到整個(gè)試驗(yàn)完畢。

牛elisa試劑盒樣本處理及要求：

    1. 血清：全血標(biāo)本請(qǐng)于室溫放置2小時(shí)或4℃過(guò)夜后于1000g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

    2. 血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8°C 1000g離心20分鐘，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

    3. 細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本：1000g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

    注：標(biāo)本溶血會(huì)影響后檢測(cè)結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè)。