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選擇合適的抗體的實(shí)用方法
閱讀：406 發(fā)布時(shí)間：2021-11-3抗體(英語:antibody)，抗體是一類能與抗原特異性結(jié)合的免疫球蛋白。(免疫球蛋白不僅僅只是抗體)是一種由漿細(xì)胞(效應(yīng)B細(xì)胞)分泌，被免疫系統(tǒng)用來鑒別與中和外來物質(zhì)如細(xì)菌、病毒等的大型Y形蛋白質(zhì)，僅被發(fā)現(xiàn)存在于脊椎動(dòng)物的血液等體液中，及其B細(xì)胞的細(xì)胞膜表面。
一、一抗的選擇
檢測(cè)任何目的靶蛋白都有不止一種抗體可供選擇，為縮小抗體的選擇范圍選中合適的抗體，需要考慮的因素：
1. 實(shí)驗(yàn)應(yīng)用的類型
一般抗體說明書都列出該抗體經(jīng)試驗(yàn)驗(yàn)證過適用于何種分析類型，如：可以應(yīng)用于WB /IHC /ICC /ELISA分析等，如果抗體說明書沒有說明提及的應(yīng)用類型，并不意味著該抗體不適用于此種分析應(yīng)用類型，而僅是說明尚未經(jīng)過此種分析試驗(yàn)驗(yàn)證。如果抗體不適用某些分析試驗(yàn)，會(huì)在抗體說明書上標(biāo)注出來不適于某分析試驗(yàn)。
2. 樣本蛋白的提取或處理
某些抗體要求樣本經(jīng)過某些特殊處理，例如：許多抗體只識(shí)別還原和變性的、表位已暴露不受二級(jí)四級(jí)結(jié)構(gòu)阻礙的蛋白樣本，另一方面，某些抗體只識(shí)別天然折疊的蛋白。當(dāng)選擇免疫組化的抗體時(shí)，應(yīng)注意某些抗體只識(shí)別未固定的冷凍的組織，而另一些抗體則使用于無需抗原修復(fù)解交聯(lián)步驟的甲醛固定石蠟包埋的組織，這些都會(huì)在抗體說明書上應(yīng)用部分標(biāo)示出來。
所以綜上所述：
適用于IP（天然蛋白）的抗體不一定適用于WB（表位暴露）
適用于WB的不一定適用于IHC
適用于IHC-P（抗原修復(fù)）的不一定適用于IHC-Fr（不修復(fù)）
購買前，務(wù)必仔細(xì)閱讀抗體說明書！
3. 樣本的物種
一般來說，在使用偶聯(lián)二抗結(jié)合無偶聯(lián)物的一抗時(shí)，一抗宿主動(dòng)物的物種選擇比較重要，對(duì)與免疫組化而言，盡可能選擇與樣本不同種系物種的一抗，從而避免二抗與樣本內(nèi)源性免疫球蛋白產(chǎn)生交叉反應(yīng)。一抗的來源主要有兔子和小鼠這兩個(gè)物種，意思也就是，如果你的樣本是兔子的，那就避免買兔來源的一抗；如果你的樣本是小鼠的，那就避免買小鼠源的一抗。
4. 單克隆與多克隆
由一種克隆產(chǎn)生的特異性抗體叫做單克隆抗體，單克隆抗體能目標(biāo)明確地與單一的特異抗原決定簇結(jié)合。同一個(gè)抗原決定簇在機(jī)體內(nèi)也可以由好幾種克隆來產(chǎn)生抗體，形成好幾種單克隆抗體混雜物，稱為多克隆抗體。
在抗原抗體反應(yīng)中，一般單克隆抗體特異性強(qiáng)，但親和力相對(duì)小，檢測(cè)抗原靈敏度相對(duì)就低；而多克隆抗體特異性稍弱，但抗體的親和力強(qiáng)，靈敏度高。
二、二抗的選擇
二抗是在其它宿主體內(nèi)制備的能與一抗或一抗片段結(jié)合的抗體，上通常連有酶或熒光素等標(biāo)簽。由于二抗所具備的優(yōu)點(diǎn)使得其在免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)中得以廣泛應(yīng)用，如WB/ELISA/IHC/IP等。二抗針對(duì)某一特定物種的所有抗體均具有特異性，因而使用特定標(biāo)記的二抗可以免去對(duì)每一個(gè)一抗進(jìn)行標(biāo)記，大大節(jié)省了時(shí)間和費(fèi)用；此外，一個(gè)一抗分子可以同時(shí)結(jié)合幾個(gè)二抗分子，從而使信號(hào)大大增強(qiáng)，提高了實(shí)驗(yàn)靈敏度。
二抗，廣義上是指專門和一抗進(jìn)行特異性反應(yīng)和結(jié)合的抗體。檢測(cè)任何目的靶蛋白都有不止一種抗體可供選擇，在選擇二抗的時(shí)候要綜合考慮一抗的類型及后繼檢測(cè)方案的要求，一般來說，選擇合適的二抗需要從以下幾個(gè)方面考慮：
1.一抗的種屬來源
根據(jù)一抗的物種來源選擇相應(yīng)的抗該物種的二抗。例如：一抗是小鼠源的單克抗體，二抗則選抗小鼠的二抗（山羊抗小鼠或兔抗小鼠等）。
2.一抗的類別亞型
二抗需與一抗的類別或亞類相匹配。這通常是針對(duì)單克隆抗體而言。多克隆抗體主要是IgG類免疫球蛋白，因此相應(yīng)的二抗就是抗IgG抗體。單克隆抗體的類別及亞型通常會(huì)在產(chǎn)品說明書中有描述，如果一抗是小鼠IgM，那么相應(yīng)的二抗就應(yīng)當(dāng)是抗IgM。如果單克隆一抗是小鼠IgG的某一亞型（IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3），那么幾乎所有的抗小鼠IgG都可以與之結(jié)合，或者你也可以選擇專門針對(duì)這一亞型的二抗。此種抗體在雙標(biāo)記實(shí)驗(yàn)中尤其合適。
3.二抗的藕聯(lián)標(biāo)記
一般來講，藕聯(lián)到二抗上的探針主要有酶（辣根過氧化酶HRP）、熒光基團(tuán)、生物素、金顆粒。選用哪種探針的二抗主要取決于具體的實(shí)驗(yàn)。WB和ELISA常用的二抗是酶標(biāo)二抗，而免疫熒光實(shí)驗(yàn)中通常使用熒光基團(tuán)標(biāo)記的二抗，而金顆粒標(biāo)記的二抗則更多的應(yīng)用于免疫電鏡中。
寫在最后：抗體廣泛應(yīng)用于各種科研領(lǐng)域，且價(jià)格不菲。謹(jǐn)慎選擇質(zhì)量可靠，適用的抗體能夠有效避免科研時(shí)間及成本的浪費(fèi)，不要因?yàn)樨潏D便宜，選擇了一些“平價(jià)替代"產(chǎn)品，其質(zhì)量及售后，無法有效保證。