詳細(xì)介紹
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng):
1)RT-PCR可以檢測組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料,不同的樣本有不同要求,實(shí)驗(yàn)前請充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況;
2)客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號;
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號積累實(shí)時(shí)監(jiān)測整個(gè)PCR進(jìn)程,最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進(jìn)行定量(包括絕對定量和相對定量)和定性分析。
主要服務(wù):DNA或RNA的絕對定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù):引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
服務(wù)流程:
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
中文名稱 | 伯氏立克次氏體柯克斯體PCR檢測試劑盒 |
英文名稱 | Coxiella burnetii ()PCR |
產(chǎn)品規(guī)格 | 50T |
保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
產(chǎn)品特點(diǎn):本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
相關(guān)產(chǎn)品:
吉氏巴貝斯蟲探針法熒光定量PCR試劑盒
大巴貝蟲探針法熒光定量PCR試劑盒
莫氏巴貝斯蟲探針法熒光定量PCR試劑盒
鮑曼不動桿菌PCR檢測試劑盒(熒光PCR法)
亨德拉病毒PCR檢測試劑盒(熒光PCR法)
實(shí)驗(yàn)過程:
一、試劑準(zhǔn)備 | 二、操作步驟 |
1. DNA模板 2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物) 3.10×PCR Buffer 4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5.Taq酶 | 1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μl Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。 |
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
儲存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
Human carbonic anhydrase,CA ELISA Kit肌原調(diào)節(jié)蛋白3ELISA試劑盒 MYOZ3免費(fèi)代測試劑
Human peptidoglycan recognition protein L,PGRP-L ELISA Kit肌原纖蛋白2ELISA試劑盒 FBN2免費(fèi)代測試劑
Human Fetuin A ELISA Kit肌原纖蛋白3ELISA試劑盒 FBN3免費(fèi)代測試劑
Human placeal protein 13,PP13 ELISA Kit肌長蛋白ELISA試劑盒 SSPN免費(fèi)代測試劑
Human fetal Fibronectin,fFN ELISA Kit肌脂蛋白ELISA試劑盒 SLN免費(fèi)代測試劑
Human desmosine,DES ELISA Kit肌質(zhì)/內(nèi)質(zhì)網(wǎng)鈣ATP酶ELISA試劑盒 ATP2A1免費(fèi)代測試劑
Human Carboxymethyl lysine,CML ELISA Kit雞1,3-βD葡葡糖苷酶(1,3-βD-Glu) ELISA檢測試劑盒
Human undercarboxylated matrix Gla protein,ucMGP ELISA kit雞1,3-βD葡葡糖苷酶(1,3-βD-Glu)試劑盒elisa
Human Undercarboxylated Osteocalcin,ucOC ELISA Kit雞17羥皮質(zhì)類固醇(17-OHCS)ELISA Kit
Human MyD88 ELISA Kit雞17羥皮質(zhì)類固醇(17-OHCS)檢測試劑盒elisa
human MNDA ELISA Kit雞17-酮類固醇(17-KS)ELISA檢測試劑盒
Human ai-myelin associated glycoprotein aibody,MAG Ab ELISA Kit雞17-酮類固醇(17-KS)ELISA試劑盒
伯氏立克次氏體柯克斯體PCR檢測試劑盒土壤中性木聚糖酶(S-NEX)測試盒/分光光度法50管/24樣
土壤中性木聚糖酶(S-NEX)測試盒/微量法100T/48S
土壤總磷/有機(jī)磷/無機(jī)磷含量測試盒/分光光度法50管/48樣
土壤總磷/有機(jī)磷/無機(jī)磷含量測試盒/微量法100T/96S
脫氫抗壞血suan還原酶(DHAR)測試盒/分光光度法50管/48樣