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人心肌細(xì)胞

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更新時(shí)間:2023-04-23 10:49:53瀏覽次數(shù):246

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
主要用途 僅供科研實(shí)驗(yàn) 組織來(lái)源 心臟組織
人心肌細(xì)胞的相關(guān)產(chǎn)品:大鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶人直腸黏膜上皮細(xì)胞5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶RPMI 8226 (人多發(fā)性骨髓瘤外周血B淋巴細(xì)胞) (STR鑒定正確)1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶人子宮頸上皮細(xì)胞5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶小鼠腸系膜上動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

詳細(xì)介紹

商品詳細(xì)介紹:

4.細(xì)胞簡(jiǎn)介:

分離自心臟組織;心臟是脊椎動(dòng)物身體中重要的一個(gè)器官,主要功能是為血液流動(dòng)提供壓力,把血液運(yùn)行至身體各個(gè)部分。心臟由心肌構(gòu)成,左心房、左心室、右心房、右心室四個(gè)腔組成。左右心房之間和左右心室之間均由間隔隔開(kāi),故互不相通,心房與心室之間有瓣膜(房室瓣),這些瓣膜使血液只能由心房流入心室,而不能倒流。心臟的作用是推動(dòng)血液流動(dòng),向器官、組織提供充足的血流量,以供應(yīng)氧和各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),并帶走代謝的終產(chǎn)物(如二氧化碳、無(wú)機(jī)鹽、尿素和尿suan等),使細(xì)胞維持正常的代謝和功能。心肌細(xì)胞呈菱形、多邊形等不規(guī)則形狀;細(xì)胞培養(yǎng)2h后開(kāi)始貼壁,呈梭形;到12h左右,細(xì)胞開(kāi)始伸出偽足,呈菱形、多角形;細(xì)胞分離培養(yǎng)48h以后,大部分伸出偽足、呈巴掌狀,部分心肌細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)搏動(dòng);心肌細(xì)胞為終末分化細(xì)胞,在體外不增殖。體外培養(yǎng)的心肌細(xì)胞可保持結(jié)構(gòu)及功能上的某些特點(diǎn),并具有自發(fā)性節(jié)律搏動(dòng),且心肌細(xì)胞的培養(yǎng)具有簡(jiǎn)便、定量、重復(fù)性好以及不受神經(jīng)體液因素的影響等特點(diǎn)。利用培養(yǎng)的心肌細(xì)胞在探索非血液動(dòng)力學(xué)因素所致的心肌肥厚的調(diào)節(jié),研究心肌細(xì)胞的生物力學(xué)、凋亡、受體下調(diào)、缺血預(yù)處理、信號(hào)通路、對(duì)作用于心臟的新藥進(jìn)行篩選并對(duì)其安全性進(jìn)行評(píng)價(jià)以及從培養(yǎng)的心肌細(xì)胞中提取有價(jià)值的生物因子等方面具有廣闊的應(yīng)用前景,對(duì)于研究其生理功能、藥物作用以及各種致病因素作用下的病理生理改變具重要意義。

5.方法簡(jiǎn)介:

實(shí)驗(yàn)室分離的采用膠原-胰聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法,并用化學(xué)試劑抑制法篩選制備而來(lái),細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

6.質(zhì)量檢測(cè):

實(shí)驗(yàn)室分離的經(jīng)α-Sarcometric actin免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

7.培養(yǎng)信息:

培養(yǎng)基  FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率    2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性  貼壁

細(xì)胞形態(tài)  梭形、多角形

傳代特性  屬于終末分化細(xì)胞;屬于不增殖細(xì)胞群

消化液  0.25%胰dan白

培養(yǎng)條件  氣相:空氣,95%;CO2,5%

產(chǎn)品屬性:

產(chǎn)品名稱(chēng)

規(guī)格

組織來(lái)源

人心肌細(xì)胞

5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

心臟組織

1.png

實(shí)驗(yàn)報(bào)告:

一、分離與培養(yǎng):

二、免疫熒光鑒定:


   1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將成1mm3左右大??;
   2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
   3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織被消化;
   4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
   5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);

 

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
   2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
   3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
   4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜;
   5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
   6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀(guān)察圖像并拍照。

硬纖毛蛋白STRC抗體 抑制因子DKK4封閉多肽 

英文名稱(chēng): Podoplanin CD151封閉多肽 

RNA聚合I抗體 整合α7封閉多肽 

骨形態(tài)發(fā)生蛋白2受體抗體 異染色質(zhì)蛋白1結(jié)合蛋白3封閉多肽 

真核翻譯起始因子2C1抗體 血管緊張III封閉多肽 

組蛋白結(jié)合蛋白SLBP抗體 受體活性修飾蛋白2封閉多肽 

磷化自噬微管相關(guān)蛋白輕鏈3抗體 鋅指蛋白84封閉多肽 

肺表面活性蛋白A抗體 RNA結(jié)合蛋白R(shí)BP封閉多肽 

氮調(diào)節(jié)因子3樣蛋白抗體 胰島樣生長(zhǎng)因子1受體相互作用蛋白1封閉多肽 

英文名稱(chēng): phospho-NFKB p65 (Ser529) 組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移MORF封閉多肽 

死亡因子4樣蛋白2抗體 MEK1/MAPKK1封閉多肽(N-端) 

減數(shù)分裂缺陷蛋白1抗體 MITF相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子封閉多肽 

天冬氨酰tRNA連接2抗體 黑色瘤相關(guān)抗原3封閉多肽 

細(xì)胞纖毛內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)同源蛋白140抗體 ZCCHV蛋白封閉多肽 

核心結(jié)合因子α1重組兔單克隆抗體 蛋白質(zhì)單ADP核糖基轉(zhuǎn)移PARP3封閉多肽 

英文名稱(chēng): RAB7A N-乙酰轉(zhuǎn)移8封閉多肽 

α1性糖蛋白1/類(lèi)粘蛋白1抗體 核斑點(diǎn)剪接調(diào)控蛋白1封閉多肽 

DOCK10蛋白抗體 維甲受體G封閉多肽 
人心肌細(xì)胞MDA-MB-468 (人乳腺癌細(xì)胞) (DMEM) (STR鑒定正確)DMEM+10% FBS+1% P/S1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶

NALM-6 (人B淋巴白血病細(xì)胞) (STR鑒定正確)RPMI-1640+10% FBS+1% P/S1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶

兔羊膜上皮細(xì)胞5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

人腦成纖維細(xì)胞5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

A172 (人膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞) (STR鑒定正確)DMEM+10% FBS+1% P/S1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶

大鼠脾臟單核細(xì)胞5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

小鼠外周血白細(xì)胞5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基,90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

 


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