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人血管外膜成纖維細(xì)胞

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更新時(shí)間:2023-04-23 10:54:41瀏覽次數(shù):286

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產(chǎn)品簡介

供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
主要用途 僅供科研實(shí)驗(yàn) 組織來源 血管組織
人血管外膜成纖維細(xì)胞的相關(guān)產(chǎn)品:MS1 (小鼠胰島內(nèi)皮細(xì)胞) (STR鑒定正確)1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶MDA-MB-436 (人乳腺癌細(xì)胞) (L15) (STR鑒定正確)1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶RKO (人結(jié)腸腺癌細(xì)胞) (STR鑒定正確)1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶NCI-H1703 (人肺鱗癌細(xì)胞) (STR鑒定正確)1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶大鼠角膜成纖

詳細(xì)介紹

產(chǎn)品屬性:

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

組織來源

人血管外膜成纖維細(xì)胞

5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

血管組織

商品詳細(xì)介紹:

4.細(xì)胞簡介:

分離自血管外膜組織;血管外膜是由疏松結(jié)締組織組成,其中含螺旋狀或縱向分布的彈性纖維和膠原纖維。血管壁的結(jié)締組織細(xì)胞以成纖維細(xì)胞為主,當(dāng)血管受損傷時(shí),成纖維細(xì)胞具有修復(fù)外膜的能力。有的動(dòng)脈中膜和外膜的交界處,有密集的彈性纖維組成的外彈性膜。成纖維細(xì)胞(Fibroblast)是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分,由胚胎時(shí)期的間充質(zhì)細(xì)胞分化而來。成纖維細(xì)胞較大,輪廓清楚,多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu),其細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形,核仁大而明顯。成纖維細(xì)胞功能活動(dòng)旺盛,細(xì)胞質(zhì)嗜弱堿性,具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動(dòng),在一定條件下,它可以實(shí)現(xiàn)跟纖維細(xì)胞的互相轉(zhuǎn)化;成纖維細(xì)胞對(duì)不同程度的細(xì)胞變性、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用。剛分離的血管外膜成纖維細(xì)胞呈圓形、折光性良好,懸浮于培養(yǎng)基中。30min細(xì)胞貼壁,其中部分開始伸出偽足,表現(xiàn)為小的突起;6h后細(xì)胞基本貼壁,伸展成梭形,胞核清晰,分布較均勻,散在生長,不聚集成團(tuán);細(xì)胞生長迅速,5-7天即呈融合狀態(tài),細(xì)胞排列緊密,有的交叉重疊生長,平坦、胞體較大,細(xì)胞質(zhì)透明,細(xì)胞核較大,呈橢圓形,顏色淡。細(xì)胞融合,并彼此連接成網(wǎng)狀;細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。血管外膜成纖維細(xì)胞是血管外膜的主要組成細(xì)胞之一,其主要生理功能合成和釋放細(xì)胞外基質(zhì)以及組織損傷后及時(shí)大量聚集修復(fù)損傷組織。

5.方法簡介:

實(shí)驗(yàn)室分離的采用胰dan白 - 膠原混合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來,細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

6.質(zhì)量檢測:

實(shí)驗(yàn)室分離的經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

7.培養(yǎng)信息:

培養(yǎng)基  FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率    2-3天換液一次

生長特性  貼壁

細(xì)胞形態(tài)  成纖維細(xì)胞樣

傳代特性  可傳5代左右;3代以內(nèi)狀態(tài)佳

消化液  0.25%胰dan白

培養(yǎng)條件  氣相:空氣,95%;CO2,5%

1.png

實(shí)驗(yàn)報(bào)告:

一、分離與培養(yǎng):

二、免疫熒光鑒定:


   1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將成1mm3左右大小;
   2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
   3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織被消化;
   4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
   5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);

 

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
   2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
   3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
   4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
   5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
   6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基,90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

骨形態(tài)形成蛋白拮抗蛋白3抗體 缺氧誘導(dǎo)因子1α/HIF-1α 封閉多肽 

嗜粒細(xì)胞趨化蛋白CCL6抗體 端粒結(jié)合蛋白2封閉多肽 

蛋白磷激PKC/CPI-17抗體 腦蛋白絲氨/蘇氨激29封閉多肽 

腺苷硫激1抗體 伸展蛋白SNPH封閉多肽 

KIAA1462蛋白抗體 絲氨組合因子4封閉多肽 

溶質(zhì)載體家族蛋白39成員A2抗體 NADSYN1蛋白封閉多肽 

肝臟型脂肪結(jié)合蛋白抗體 ISLR蛋白封閉多肽 

絲氨蛋白激1抗體 磷脂磷LPIN3封閉多肽 

微管相關(guān)末端結(jié)合蛋白2抗體 重組2核衣殼蛋白 

突觸泡蛋白2A抗體 突觸結(jié)合蛋白樣蛋白4封閉多肽 

英文名稱: PRDX2 表皮生長因子樣激受體1 

交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Chicken, Dog, Pig, Cow, Horse, Rabbit, Goose, Zebrafish, Sheep, GPV, Firefly, Bee, Belt Jellyfish, Fish, GuineaPig, Hamster, Shrimp, Fruit Fly, Goat, Monkey, Cat, Donkey, Duck, Chimpanzee, Arabidopsis Thalian 整合α11封閉多肽 

肝癌缺失基因1/2抗體 生物標(biāo)記重組人CD122/IL2RB蛋白 

血藍(lán)蛋白抗體 Cy3標(biāo)記胰糜 

卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白147抗體 二磷3核苷封閉多肽 

表皮生長因子受體底物8抗體 磷化MCM2蛋白封閉多肽 

磷化膜相關(guān)蛋白Numb抗體 荷爾蒙敏感脂肪封閉多肽 

乳腺腫瘤新因子1抗體 白細(xì)胞介增強(qiáng)子結(jié)合因子3封閉多肽 
人血管外膜成纖維細(xì)胞AML-193 (人急性單核細(xì)胞白血病單核細(xì)胞)IMDM+5μg/ml Insulin+5μg/ml Transferrin+5ng/ml GM-CSF+5% FBS+1% P/S1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶

小鼠前脂肪細(xì)胞5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

HCC1937 (人乳腺癌細(xì)胞) (STR鑒定正確)RPMI-1640+10% FBS+1% P/S1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶

小鼠腸巨噬細(xì)胞5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

豬脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

P3/NSI/1-Ag4-1 [NS-1] (小鼠骨髓瘤細(xì)胞) (種屬鑒定正確)DMEM+10% FBS+1% P/S1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶

小鼠肺動(dòng)脈成纖維細(xì)胞5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

 


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