實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明:
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕;
4.如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過(guò)大,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率;
5.如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴(lài)氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
產(chǎn)品名稱(chēng):膠原酶I細(xì)胞
英文名稱(chēng):膠原酶I
貨號(hào):BJ-01X10071
規(guī)格:100mg
我們的細(xì)胞株來(lái)源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,購(gòu)買(mǎi)到貨后,公司產(chǎn)品僅用于科研由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存,凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過(guò)QC檢測(cè),100%進(jìn)口來(lái)源,100%保證5代以?xún)?nèi),活力>95%,無(wú)細(xì)菌、真菌、支原體污染。 細(xì)胞到達(dá)客戶(hù)手中,1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問(wèn)題,導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡,我們公司都可以免費(fèi)再向客戶(hù)提供一次。
培養(yǎng)操作步驟 :
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
操作要點(diǎn):
1)將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱;準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管,加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2)將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫(可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯,裝滿(mǎn)37℃的水,細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi),再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中)。輕輕晃動(dòng)凍存管,使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍,使細(xì)胞能盡快通過(guò)最易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒(méi)入水中,BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi),將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi),輕輕吹打液體,使細(xì)胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次,均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,吹打制成細(xì)胞懸液。
5)將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi),補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基,輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻,放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6)第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況,換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng),待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代,細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。
猴Rap鳥(niǎo)嘌呤交換因子1(RAPGEF1)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒2-羰丁鈉鹽 牛至油 FCC硫鐿(III) 99.99% metals basis
猴腦紅蛋白(NGB)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒間羥聯(lián)苯2-苯乙 硫代異酯 99%硫鐿,八水 99.9% REO
猴細(xì)絲蛋白Bβ(FLNβ)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒間羥聯(lián)苯2-苯乙 硫代異酯 99%,FG二氧化鋯 99.99% metals basis
猴BCL2相關(guān)死亡促進(jìn)因子因子(BAD)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒 間羥聯(lián)苯廣藿香油 食品級(jí)二氧化鋯 99.99% metals basis,D50:0.2~0.4μm
猴血紅素氧化2(HO2)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒 鞘磷脂迷迭香油 FCC二氧化鋯 AR,99.0%
猴STAT蛋白抑制因子3(PIAS3)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒 鞘磷脂依蘭依蘭油 特級(jí)二氧化鋯 99.99% metals basis,50nm
猴促生長(zhǎng)激素(GH)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒N-乙酰-4-哌啶三乙 96%硒化鋅 99.99% metals basis,1-3mm
猴紅藻氨離子型谷氨受體2(GRIK2)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒 N-乙酰-4-哌啶4-(三氟)異苯酯 99%碲化鋅 99.99% metals basis
猴叉頭框蛋白C1(FOXC1)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒玉米赤霉3-(三氟)芐 98%碲化鋅 99.999% metals basis,塊狀,1-6mm
猴小泛素相關(guān)修飾蛋白2 (SUMO2)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒玉米赤霉3-氟-5-(三氟)苯 97%碳化鋯 50nm, 99%
猴Podocin蛋白(PDCN)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒3-溴溴化氫虎杖苷 98%碳化鋯 99%,1μm
猴大腸癌專(zhuān)一抗原3(CCSA-3)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒 3-溴溴化氫雙三氟磺酰亞鋰 99%氧化鋅 AR,99%
猴金屬硫蛋白1M (MT1M)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒3-溴溴化氫雙三氟磺酰亞 95%氧化鋅 CP,99%
猴血小板反應(yīng)蛋白2(TSP-2)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒 2,3-二羥苯五氟 97%氧化鋅 電子級(jí)
猴去氨精氨加壓素(dDAVP)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒 2,3-二羥苯N-苯雙(三氟磺亞) 98%氧化鋅 99.999% metals basis
猴胸腺激活調(diào)節(jié)趨化因子(TARC)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒2,3-二羥苯2,2,2-三氟乙 99.5%氧化鋅 SP
膠原酶I細(xì)胞雞卵白蛋白槐苷Human, Mouse
抗腫瘤P53抗原梨苷Human, Mouse
撲克蒙蛋白梨果(標(biāo)準(zhǔn)品)Human, Mouse
核糖體蛋白S6激1梨葉(標(biāo)準(zhǔn)品)Human
蛋白A芒柄花苷(標(biāo)準(zhǔn)品)Human, Mouse
P-糖蛋白抗原芒柄花素;芒柄花黃素(標(biāo)準(zhǔn)品)Human
磷化受體結(jié)合絲氨蘇氨激2玫果(標(biāo)準(zhǔn)品)Human
萊克多巴與牛血清白蛋白偶聯(lián)物囊(標(biāo)準(zhǔn)品)Human
萊克多巴與血藍(lán)蛋白偶聯(lián)物桐Human, Mouse