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人結(jié)腸成纖維細(xì)胞

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更新時(shí)間:2023-04-23 10:37:24瀏覽次數(shù):250

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產(chǎn)品簡介

供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
主要用途 僅供科研實(shí)驗(yàn) 組織來源 結(jié)腸組織
人結(jié)腸成纖維細(xì)胞的相關(guān)產(chǎn)品:COS-1 (非洲綠猴SV40轉(zhuǎn)化的腎細(xì)胞)1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶人宮頸癌組織源細(xì)胞5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶小鼠骨髓單核細(xì)胞5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶293ET (人胚腎細(xì)胞(SV40T和EBNA1基因修飾細(xì)胞))1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶人冠狀動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

詳細(xì)介紹

產(chǎn)品屬性:

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

組織來源

人結(jié)腸成纖維細(xì)胞

5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

結(jié)腸組織

商品詳細(xì)介紹:

4.細(xì)胞簡介:

分離自結(jié)腸組織;結(jié)腸在右髂窩內(nèi)續(xù)于盲腸,在第3骶椎平面連接直腸。結(jié)腸分升結(jié)腸、橫結(jié)腸、降結(jié)腸和乙狀結(jié)腸4部分,大部分固定于腹后壁,結(jié)腸的排列酷似英文字母“M",將小腸包圍在內(nèi)。結(jié)腸橫切面由內(nèi)到外依次為:黏膜(上皮層、固有層、黏膜肌層),黏膜下層(疏松結(jié)締組織),肌層(內(nèi)環(huán)形、外縱行兩層平滑?。?,外膜(纖維膜或漿膜)。結(jié)腸成纖維細(xì)胞主要分布于外膜(纖維膜或漿膜)結(jié)締組織內(nèi)。成纖維細(xì)胞對(duì)不同程度的細(xì)胞變性、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用。剛分離的牙周膜成纖維細(xì)胞呈圓形、折光性良好,懸浮于培養(yǎng)基中。30min細(xì)胞貼壁,其中部分開始伸出偽足,表現(xiàn)為小的突起;6h后細(xì)胞基本貼壁,伸展成梭形,胞核清晰,分布較均勻,散在生長,不聚集成團(tuán);細(xì)胞生長迅速,5-7天即呈融合狀態(tài),細(xì)胞排列緊密,有的交叉重疊生長,平坦、胞體較大,細(xì)胞質(zhì)透明,細(xì)胞核較大,呈橢圓形,顏色淡。細(xì)胞融合,并彼此連接成網(wǎng)狀;細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。牙周膜成纖維細(xì)胞(PLFs)作為牙周膜的主體細(xì)胞,是牙周膜主要的間質(zhì)細(xì)胞,它不僅具有合成膠原、基質(zhì)、彈力纖維和糖蛋白的功能,還有吸收膠原吞噬異物的能力,還參與了牙周組織的病變、修復(fù)及再生過程?,F(xiàn)在,利用牙周膜細(xì)胞建立體外模型,已經(jīng)成為有關(guān)員研究牙周組織疾病的重要手段。

5.方法簡介:

實(shí)驗(yàn)室分離的采用胰dan白 - 膠原混合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來,細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

6.質(zhì)量檢測:

實(shí)驗(yàn)室分離的經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

7.培養(yǎng)信息:

培養(yǎng)基  FBS、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率    2-3天換液一次

生長特性  貼壁

細(xì)胞形態(tài)  成纖維細(xì)胞樣

傳代特性  可傳3-5代左右

消化液  0.25%胰dan白

培養(yǎng)條件  氣相:空氣,95%;CO2,5%

1.png

實(shí)驗(yàn)報(bào)告:

一、分離與培養(yǎng):

二、免疫熒光鑒定:


   1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將成1mm3左右大?。?/span>
   2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
   3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織被消化;
   4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
   5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);

 

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
   2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
   3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
   4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
   5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
   6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基,90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

磷化組蛋白去乙?;?/span>4抗體 酪氨蛋白激受體B4封閉多肽 

初生多肽相關(guān)復(fù)合物亞單位α,肌肉特異型蛋白抗體 環(huán)腺苷應(yīng)答元件結(jié)合蛋白5封閉多肽 

立即早期癌基因BRLF1/鼻咽癌基因抗體 酰基結(jié)合結(jié)構(gòu)域蛋白6封閉多肽 

富含半胱氨的性分泌蛋白抗體 載脂蛋白1封閉多肽 

鈣粘蛋白相關(guān)的神經(jīng)受體2抗體 同源盒蛋白HOX13封閉多肽 

α1微球蛋白單克隆抗體 CD24封閉多肽 

突觸泡蛋白2C抗體 G蛋白偶聯(lián)受體24封閉多肽 

褪黑受體1A/松果體受體1A抗體 受體轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白3封閉多肽 

EVX2蛋白抗體 磷化胰島受體封閉多肽 

WDR68蛋白抗體 甲狀腺核轉(zhuǎn)錄因子-1封閉多肽 

二磷腺苷核糖基轉(zhuǎn)移4抗體 轉(zhuǎn)錄因子HES6封閉多肽 

1號(hào)染色體開放閱讀框106抗體 DNA損傷誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄蛋白4封閉多肽 

英文名稱: KT3-Tag 動(dòng)力蛋白輕鏈 

磷化一氧化氮合成-1(神經(jīng)型)抗體 脫氫11/丙型肝炎病毒核心蛋白封閉多肽 

粘合連接相關(guān)蛋白1抗體 白三烯B4受體2封閉多肽 

SAMD9蛋白抗體 突觸結(jié)合蛋白5封閉多肽 

雌激受體β抗體 蛋白精氨N甲基4封閉多肽 

磷化雄激受體抗體 腺苷激2封閉多肽 
人結(jié)腸成纖維細(xì)胞大鼠卵巢顆粒細(xì)胞5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

大鼠牙齦上皮細(xì)胞5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

HBE (人支氣管上皮樣細(xì)胞)RPMI-1640+10% FBS+1% P/S1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶

大鼠神經(jīng)少突膠質(zhì)細(xì)胞5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

HULEC-5a (人肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞) (STR鑒定正確)MCDB131+10ng/ml EGF+1μg/ml Hydrocortisone+10mM L-glutamine+10% FBS+1% P/S1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶

LA795 (小鼠肺腺癌細(xì)胞)(種屬鑒定正確)RPMI-1640+10% FBS+1% P/S1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶

小鼠子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

 


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