淀粉含量試劑盒(蒽酮比色法)公司正熱銷(xiāo)的產(chǎn)品：小鼠過(guò)敏毒素/補(bǔ)體片斷4a(C4a)ELISA試劑盒樣本冰凍切片核氧化（8-Hydroxyguanine）免疫染色測(cè)定試劑盒
804-63-7硫奎寧動(dòng)物細(xì)胞氧化應(yīng)激活性氧（ROS）魯米諾化學(xué)發(fā)光法定量檢測(cè)試劑盒
328-50-7α-酮戊二細(xì)胞培養(yǎng)懸液氧化應(yīng)激活性氧（ROS）魯米諾化學(xué)發(fā)光法定量檢測(cè)試劑盒
柱式植物DNA提取試劑盒細(xì)胞氧化應(yīng)激活性氧（

公司產(chǎn)品僅用于科研產(chǎn)品屬性：

自備儀器和用品：

酶標(biāo)儀、離心機(jī)、移液器、96孔板、研缽、冰和蒸餾水

粗酶液提?。?/span>

1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備：

細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。

組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。

2、血清（漿）樣品：直接檢測(cè)。

 

測(cè)定步驟：

1、 酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至450nm。

2、 試劑三的稀釋：將試劑三用蒸餾水稀釋50倍，用多少配多少。（試劑三和蒸餾水1：49稀釋。

3、 工作液配制：在試劑一加入100μl試劑二，充分混勻。配好的試劑4℃避光可保存一周。（若一次性測(cè)定樣本較少，可按照實(shí)際用量將試劑一和試劑二按照20ml：0.1ml的比例混勻配制）

4、 將一瓶試劑四用5ml蒸餾水溶解（溶解后一周內(nèi)用完）。

5、 樣本測(cè)定

注意事項(xiàng)

1、試劑三為酶，不可冷凍，使用時(shí)在冰上放置。

2、對(duì)照管只需要做一管。

3、SOD為什么有的樣本測(cè)定管大于對(duì)照管，對(duì)照管數(shù)值在什么范圍？

對(duì)照管的范圍是0.4-1。對(duì)照管吸光值過(guò)低可能是（1）試劑三活性低，可以適當(dāng)減少稀釋倍數(shù)；（2)沒(méi)有按順序加試劑；（3）反應(yīng)時(shí)間不夠，可以延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間（反應(yīng)時(shí)間30min可以延長(zhǎng)到40min）。對(duì)照管吸光值過(guò)高可能是試劑三未按操作說(shuō)明書(shū)稀釋相應(yīng)倍數(shù)。

若出現(xiàn)測(cè)定管大于對(duì)照管，可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大，為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測(cè)，通?？梢允箿y(cè)定正常。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。

繆勒管抑制物質(zhì)/抗繆勒管激素(MIS/AMH)試劑盒烏發(fā)次硝鉍 AR,99.5%1H-咪唑-4- 98%

繆勒管抑制物質(zhì)/抗繆勒管激素(MIS/AMH)試劑盒烏沙甙元硝鉍 CP,99.0%三氟磺酐 98%

β素(BTC) 試劑盒五味子脂素 M2次碳鉍 AR,90.0%3-溴 98%

β素(BTC) 試劑盒五乙兒茶素酯化鈣,二水 AR苯并-15-冠-5 98%

胎球蛋白A(FETU-A)試劑盒五乙紫丁香甙酯無(wú)水化鈣 AR,96.0%鄰苯二酚-O，O′-二乙 97%

胎球蛋白A(FETU-A)試劑盒西米杜鵑無(wú)水化鈣 CP,96.0%1-(3-氨)吡咯烷 97%

胎盤(pán)核糖核抑止劑(HPRI)試劑盒 西米杜鵑無(wú)水化鈣 ACS2-苯氧溴乙烷 98%

胎盤(pán)核糖核抑止劑(HPRI)試劑盒 喜果苷無(wú)水化鈣 99.99% metals basis代異丁烷 98%

胎盤(pán)蛋白(PP)試劑盒 松馳素D檸檬,一水 99.995% metals basis代正烷 99%

胎盤(pán)蛋白(PP)試劑盒 細(xì)葉桉萜酯 A尼泊金乙酯 AR,99%代正烷 分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.8% (GC)

胎盤(pán)催乳素(HPL)試劑盒 仙鶴草內(nèi)酯硫亞鐵，七水 AR代仲丁烷 99%

胎盤(pán)催乳素(HPL)試劑盒 仙鶴草內(nèi)酯-6-O-葡萄糖甙硫亞鐵，七水 99.99% metals basis1-代正戊烷  Standard for GC, ≥99.5% (GC)

胎兒血紅蛋白(HBF)試劑盒 腺華素硫亞鐵，七水 ACS, ≥99.0%1-代正戊烷 99%

胎兒血紅蛋白(HBF)試劑盒 香橙素，香樹(shù)素硫亞鐵，七水 for plant cell culture, ≥99%環(huán)戊乙 98%

抗巨病抗體IgM(anti-CMV IgM)試劑盒 小構(gòu)樹(shù) B檸檬 CP,99.0%1,4-二丁烷 98%

抗巨病抗體IgM(anti-CMV IgM)試劑盒 小葉九里香內(nèi)酯鈉石灰 醫(yī)用級(jí)，紅色2-羥-4-氧苯 98%
淀粉含量試劑盒(蒽酮比色法)FITC標(biāo)記重組金黃色葡萄球菌蛋白A戈米辛HHuman, Mouse, Rat

辣根過(guò)氧化物標(biāo)記的重組蛋白G戈米辛J(標(biāo)準(zhǔn)品)Human, Mouse, Rat

金標(biāo)記兔抗熒光素 (10nm/15nm)戈米辛N(標(biāo)準(zhǔn)品)Human

Alexa Fluor 488標(biāo)記兔IgG(流式同型對(duì)照)戈米辛OHuman, Mouse, Rat

熒光素PE-Cy5標(biāo)記兔IgG(流式同型對(duì)照)格列風(fēng)內(nèi)酯（標(biāo)準(zhǔn)品）Human

兔IgG(親和層析純化)葛根（標(biāo)準(zhǔn)品）Human

熒光素PE-Cy3標(biāo)記兔IgG(流式同型對(duì)照)葛根素(標(biāo)準(zhǔn)品)Human, Mouse, Rat

(親和純化) 兔IgM葛根素-6''-O-木糖苷Human

熒光素PE標(biāo)記兔IgG(流式同型對(duì)照)葛根素芹菜糖苷Human, Mouse

操作步驟：

1. 樣品的準(zhǔn)備：

a. 細(xì)胞樣品的準(zhǔn)備：收集細(xì)胞，用4 ℃或冰浴預(yù)冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預(yù)冷組織細(xì)胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見(jiàn)電動(dòng)勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心，取上清作為待測(cè)樣品。

b. 組織樣品的準(zhǔn)備：動(dòng)物用生理鹽水(0.9% NaCl ，含有0.16mg/ml肝素鈉) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細(xì)胞裂解液比例， 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見(jiàn)電動(dòng)勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心，取上清作為待測(cè)樣品。

c. 使用BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒測(cè)定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細(xì)胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個(gè)活力單位左右(不同細(xì)胞和組織的差異會(huì)比較大，該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準(zhǔn)備20-100 ug蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測(cè)。

d. 根據(jù)蛋白濃度和預(yù)計(jì)的蛋白使用量，用試劑盒提供的SOD檢測(cè)緩沖液適當(dāng)稀釋樣品。例如，小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準(zhǔn)備好的樣品如果當(dāng)天測(cè)定，可以冰浴保存；如果當(dāng)天不能完成測(cè)定，可以-70 ℃凍存，但建議盡量當(dāng)天完成測(cè)定。

2. 試劑盒的準(zhǔn)備工作：

a. WST-8酶工作液的配制： 參照下表，根據(jù)待檢測(cè)樣品(包括標(biāo)準(zhǔn)品) 數(shù)量，配制適量WST-8酶工作液，配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存，可當(dāng)天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。

注意：由于酶溶液的用量較少且易沉降，必須注意在使用前先輕輕離心一下，然后適當(dāng)混勻后再使用。

b. 反應(yīng)啟動(dòng)工作液配制：將試劑盒提供的反應(yīng)啟動(dòng)液 (40X) 溶解后混勻，按1μl 反應(yīng)啟動(dòng)液(40X) 加入39μl SOD 檢測(cè)緩沖液的比例進(jìn)行稀釋，即為反應(yīng)啟動(dòng)工作液。4℃或冰浴保存，可當(dāng)天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。

c. (可選做) SOD 標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)備：需自備SOD標(biāo)準(zhǔn)品，用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至如下系列濃度：20U/ml，10U/ml ，5U/ml，2.5U/ml，1.25U/ml，0.625U/ml。在隨后的檢測(cè)中可以各取20微升，參考樣品進(jìn)行檢測(cè)。說(shuō)明：為避免稀釋后SOD酶活性的下降， SOD標(biāo)準(zhǔn)品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用；本試劑盒對(duì)于SOD的檢測(cè)并不需要SOD作為標(biāo)準(zhǔn)品，但可以使用SOD標(biāo)準(zhǔn)品作為陽(yáng)性對(duì)照或作為對(duì)SOD活性定量的參考。

3. 樣品測(cè)定：

a. 參考下表使用96孔板加入各個(gè)組分，注意設(shè)置樣品孔和各種空白對(duì)照孔。

注意：加入反應(yīng)啟動(dòng)工作液后反應(yīng)即會(huì)開(kāi)始，可以在低溫操作或用排槍操作以減小各孔間因加入反應(yīng)啟動(dòng)工作液的時(shí)間先后差異而導(dǎo)致的誤差。

b. 37℃孵育30分鐘。

說(shuō)明：孵育25至35分鐘檢測(cè)出來(lái)的SOD活力無(wú)顯著差異，但為保證檢測(cè)結(jié)果的一致性，推薦孵育30分鐘。

c. 450nm 測(cè)定吸光度。如無(wú)450nm 濾光片，可以使用420-480nm 的濾光片。也可以使用大于600nm 的波長(zhǎng)作為參考波長(zhǎng)進(jìn)行雙波長(zhǎng)測(cè)定。

4. 樣品中總SOD活力的計(jì)算：

a. 抑制百分率的計(jì)算：

參考如下計(jì)算公式計(jì)算抑制百分率：

抑制百分率＝[(A空白對(duì)照1－A空白對(duì)照2)－(A樣品－A空白對(duì)照3)] / (A空白對(duì)照1－A空白對(duì)照2) × 100%

如果沒(méi)有設(shè)置空白對(duì)照3，則可以把計(jì)算公式簡(jiǎn)化為：

抑制百分率＝(A空白對(duì)照1－A樣品) / (A空白對(duì)照1－A空白對(duì)照2) × 100%

如果計(jì)算出來(lái)的抑制百分率小于30% 或大于70% ，則通常需要把該樣品重新測(cè)定。盡量使樣品的抑制百分率在30-70%范圍內(nèi)。如果測(cè)定出來(lái)的抑制百分率偏高，則需適當(dāng)稀釋樣品；如果測(cè)定出來(lái)的抑制百分率偏低，則需重新準(zhǔn)備濃度較高的待測(cè)樣品。

b. SOD酶活力單位的定義：在上述化酶藕聯(lián)反應(yīng)體系中抑制百分率為50% 時(shí)，反應(yīng)體系中的SOD酶活力定義為一個(gè)酶活力單位 (unit)。注意：SOD的活力單位的定義方式有很多種，不同的活力單位需根據(jù)其定義的不同進(jìn)行適當(dāng)換算。