詳細(xì)介紹
實驗注意事項:
1)RT-PCR可以檢測組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料,不同的樣本有不同要求,實驗前請充分溝通確認(rèn)實驗方案和樣本情況;
2)客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號;
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
實時熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程,最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴(kuò)增的增加。運用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進(jìn)行定量(包括絕對定量和相對定量)和定性分析。
主要服務(wù):DNA或RNA的絕對定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù):引物設(shè)計、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
服務(wù)流程:
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
中文名稱 | 脊髓灰質(zhì)炎病毒2型PCR檢測試劑盒 |
英文名稱 | |
產(chǎn)品規(guī)格 | 50T |
保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
產(chǎn)品特點:本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
相關(guān)產(chǎn)品:
馬腺病毒探針法熒光定量PCR試劑盒
馬腺疫鏈球菌PCR檢測試劑盒
馬隱秘桿菌PCR檢測試劑盒
馬隱秘桿菌PCR檢測試劑盒
馬隱秘桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒
實驗過程:
一、試劑準(zhǔn)備 | 二、操作步驟 |
1. DNA模板 2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計不同的引物) 3.10×PCR Buffer 4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5.Taq酶 | 1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μl Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。 |
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
儲存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
人組織多肽抗原(TPA)ELISA檢測試劑盒 Porcine growth hormone, GH Elisa Kit
人組織蛋白去乙?;?/span>(HD)試劑盒elisaPorcine Cortisol Elisa Kit
人組織蛋白去乙?;?/span>(HD)ELISA試劑盒 Porcine brain natriuretic peptide, BNP Elisa Kit
人組織抗體(CathAb)檢測試劑盒elisaPorcine endothelin 1, ET-1 Elisa Kit
人組織抗體(Cath Ab)ELISA KitPorcine Immunoglobulin M, IgM Elisa Kit
人組織S(CTSS)ELISA試劑盒Porcine Immunoglobulin G, IgG Elisa Kit
人組織L1(CTSL1/CTSL)試劑盒ELISAPorcine Immunoglobulin E, IgE Elisa Kit
人組織K(cath-K)ELISA檢測試劑盒Porcine soluble Vascuolar cell adhesion molecules 1, sVCAM-1 Elisa Kit
人組織K(cath-K) ELISA試劑盒 Porcine macrophage inflammatory protein 1α, MIP-1α Elisa Kit
人組織H(CTSH)ELISA檢測試劑盒Porcine Keratinocyte Growth Factor, KGF Elisa Kit
人組織G自身抗體(Cath G Ab)ELISA試劑盒Porcine tissue inhibitors of metalloproteinase 1, TIMP-1 Elisa Kit
人組織G(cath-G)試劑盒ELISAPorcine matrix metalloproteinase 9, MMP-9 Elisa Kit
人組織D(cath-D)檢測試劑盒elisaPorcine Testoterone, T Elisa Kit
人組織D(cath-D) 試劑盒 ELISAPorcine hepatocyte growth factor, HGF Elisa Kit
脊髓灰質(zhì)炎病毒2型PCR檢測試劑盒?;铣擅搁L鏈家族成員1(ACSL1)重組蛋白Recombina Acyl Coenzyme A Syhetase Long Chain Family, Member 1 (ACSL1)
?;铣擅钢墟溂易宄蓡T1(ACSM1)重組蛋白Recombina Acyl Coenzyme A Syhetase Medium Chain Family, Member 1 (ACSM1)
?;铣擅付替溂易宄蓡T2(ACSS2)重組蛋白Recombina Acyl Coenzyme A Syhetase Short C?