Tauropine 脫氫酶(TDH)活性測(cè)定試劑盒公司正銷售的產(chǎn)品：細(xì)胞腫大病毒屬虹彩病毒（ISKNV/RSIV） 試劑盒（恒溫?zé)晒夥ǎ┘?xì)胞CASPASE-4蛋白表達(dá)比色法定量檢測(cè)試劑盒
苦參堿CAS:519-02-8細(xì)胞CASPASE-4蛋白表達(dá)熒光定量檢測(cè)試劑盒
苔黑酚葡萄糖苷CAS:21082-33-7CASPASE-4蛋白表達(dá)西方雜交分析試劑盒
美拉諾坦CAS:75921-69-6CASP

公司產(chǎn)品僅用于科研產(chǎn)品屬性：

自備儀器和用品：

酶標(biāo)儀、離心機(jī)、移液器、96孔板、研缽、冰和蒸餾水

粗酶液提?。?/span>

1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備：

細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。

組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。

2、血清（漿）樣品：直接檢測(cè)。

 

測(cè)定步驟：

1、 酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至450nm。

2、 試劑三的稀釋：將試劑三用蒸餾水稀釋50倍，用多少配多少。（試劑三和蒸餾水1：49稀釋。

3、 工作液配制：在試劑一加入100μl試劑二，充分混勻。配好的試劑4℃避光可保存一周。（若一次性測(cè)定樣本較少，可按照實(shí)際用量將試劑一和試劑二按照20ml：0.1ml的比例混勻配制）

4、 將一瓶試劑四用5ml蒸餾水溶解（溶解后一周內(nèi)用完）。

5、 樣本測(cè)定

注意事項(xiàng)

1、試劑三為酶，不可冷凍，使用時(shí)在冰上放置。

2、對(duì)照管只需要做一管。

3、SOD為什么有的樣本測(cè)定管大于對(duì)照管，對(duì)照管數(shù)值在什么范圍？

對(duì)照管的范圍是0.4-1。對(duì)照管吸光值過低可能是（1）試劑三活性低，可以適當(dāng)減少稀釋倍數(shù)；（2)沒有按順序加試劑；（3）反應(yīng)時(shí)間不夠，可以延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間（反應(yīng)時(shí)間30min可以延長(zhǎng)到40min）。對(duì)照管吸光值過高可能是試劑三未按操作說明書稀釋相應(yīng)倍數(shù)。

若出現(xiàn)測(cè)定管大于對(duì)照管，可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大，為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測(cè)，通?？梢允箿y(cè)定正常。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。

大鼠白介素15(IL-15)試劑盒Tris-甘氨電泳粉劑(5×)溴代異丁烷 98%4-溴聯(lián)苯 分析標(biāo)準(zhǔn)品

大鼠白介素16(IL-16)試劑盒Tris-甘氨電泳緩沖液(5×)溴代叔丁烷, 包含0.5%碳穩(wěn)定劑, CP3-溴聯(lián)苯  分析標(biāo)準(zhǔn)品

大鼠白介素16(IL-16)試劑盒Tris-甘氨電泳緩沖液(5×)溴代叔丁烷  >98.0%(GC)3-溴聯(lián)苯  97%

大鼠白介素17(IL-17)試劑盒SDS-PAGE濃縮膠緩沖液(4×)溴代正癸烷 CP高精度150KG電子稱（上海恒器廠） 大稱量150KG，精度10G

大鼠白介素17(IL-17)試劑盒SDS-PAGE濃縮膠緩沖液(4×)溴代正癸烷 AR，98%對(duì)溴苯酚 98%

大鼠白介素1可溶性受體Ⅰ(IL-1sRⅠ)試劑盒SDS-PAGE分離膠緩沖液(4×)溴代十二烷 98%對(duì)溴苯 99%

大鼠白介素1可溶性受體Ⅰ(IL-1sRⅠ)試劑盒SDS-PAGE分離膠緩沖液(4×)對(duì)溴苯 99%2-溴苯酚 99%

大鼠可溶性E選擇素(sE-selectin)試劑盒Acr-Bis粉劑(30%,29:1)對(duì)溴苯 分析標(biāo)準(zhǔn)品，≥99.5% (GC)2-溴苯酚 分析標(biāo)準(zhǔn)品，99.5%（HPLC)

大鼠可溶性E選擇素(sE-selectin)試劑盒Acr-Bis粉劑(40%,19:1)(2-溴乙)苯 98%鄰氧苯 99%

大鼠白介素1可溶性受體Ⅱ(IL-1sRⅡ)試劑盒Acr-Bis粉劑(40%,39:1)1-溴十八烷 97%1,3,5-三溴苯 99%

大鼠白介素1可溶性受體Ⅱ(IL-1sRⅡ)試劑盒Acr-Bis(30%,29:1)1-溴-2-乙烷 98%葡萄糖鈣 99%

大鼠17羥皮質(zhì)類固(17-OHCS)試劑盒Acr-Bis(30%,29:1)1-溴-3-苯 99%葡萄糖亞鐵 USP級(jí)

大鼠17羥皮質(zhì)類固(17-OHCS)試劑盒Acr-Bis(30%,29:1)對(duì)溴苯 99%葡萄糖鋅 98%

大鼠N-乙酰-β-D-氨葡萄糖苷(NAG)試劑盒Acr-Bis(40%,19:1)溴代十六烷 97%過氧化氫異苯 80-85 %

大鼠N-乙酰-β-D-氨葡萄糖苷(NAG)試劑盒Acr-Bis(40%,39:1)溴代異烷  99%2,4-二氨苯 CP

大鼠17-類固(17-KS)試劑盒Acr-Bis(20%,19.6%:0.4%)溴代仲丁烷 CP2,4-二氨苯 98%
Tauropine 脫氫酶(TDH)活性測(cè)定試劑盒SNX27蛋白抗體化黃連素水合物 Berberine Chloride Hydrate>98.0%(LC&T)Human

電壓開啟的鈉離子通道SCN9A抗體化黃連素水合物 Berberine Chloride Hydrate>98.0%(LC&T)Human, Mouse

5-羥色受體4抗體芐脲 Benzylurea >98.0%(N)Human

5-羥色受體3抗體芐三氫氧化銨(40%的溶液) Benzyltrimethylammonium Hydroxide (40% in Methanol)Human, Mouse, Rat

抑癌因SNF2β抗體芐三氫氧化銨(40%的溶液) Benzyltrimethylammonium Hydroxide (40% in Methanol)Human, Mouse, Rat

血清應(yīng)答因子抗體4,4'-聯(lián)苯酚 4,4'-Biphenol >99.0%(GC)Human

膽固調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白1抗體4,4'-聯(lián)苯酚 4,4'-Biphenol >99.0%(GC)Human

泛素樣修飾體-1抗體4,4'-聯(lián)苯酚 4,4'-Biphenol >99.0%(GC)Human, Mouse

信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子1抗體生物素 Biotin >98.0%(T)Human, Mouse, Rat

操作步驟：

1. 樣品的準(zhǔn)備：

a. 細(xì)胞樣品的準(zhǔn)備：收集細(xì)胞，用4 ℃或冰浴預(yù)冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預(yù)冷組織細(xì)胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動(dòng)勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心，取上清作為待測(cè)樣品。

b. 組織樣品的準(zhǔn)備：動(dòng)物用生理鹽水(0.9% NaCl ，含有0.16mg/ml肝素鈉) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細(xì)胞裂解液比例， 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動(dòng)勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心，取上清作為待測(cè)樣品。

c. 使用BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒測(cè)定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細(xì)胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個(gè)活力單位左右(不同細(xì)胞和組織的差異會(huì)比較大，該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準(zhǔn)備20-100 ug蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測(cè)。

d. 根據(jù)蛋白濃度和預(yù)計(jì)的蛋白使用量，用試劑盒提供的SOD檢測(cè)緩沖液適當(dāng)稀釋樣品。例如，小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準(zhǔn)備好的樣品如果當(dāng)天測(cè)定，可以冰浴保存；如果當(dāng)天不能完成測(cè)定，可以-70 ℃凍存，但建議盡量當(dāng)天完成測(cè)定。

2. 試劑盒的準(zhǔn)備工作：

a. WST-8酶工作液的配制： 參照下表，根據(jù)待檢測(cè)樣品(包括標(biāo)準(zhǔn)品) 數(shù)量，配制適量WST-8酶工作液，配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存，可當(dāng)天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。

注意：由于酶溶液的用量較少且易沉降，必須注意在使用前先輕輕離心一下，然后適當(dāng)混勻后再使用。

b. 反應(yīng)啟動(dòng)工作液配制：將試劑盒提供的反應(yīng)啟動(dòng)液 (40X) 溶解后混勻，按1μl 反應(yīng)啟動(dòng)液(40X) 加入39μl SOD 檢測(cè)緩沖液的比例進(jìn)行稀釋，即為反應(yīng)啟動(dòng)工作液。4℃或冰浴保存，可當(dāng)天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。

c. (可選做) SOD 標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)備：需自備SOD標(biāo)準(zhǔn)品，用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至如下系列濃度：20U/ml，10U/ml ，5U/ml，2.5U/ml，1.25U/ml，0.625U/ml。在隨后的檢測(cè)中可以各取20微升，參考樣品進(jìn)行檢測(cè)。說明：為避免稀釋后SOD酶活性的下降， SOD標(biāo)準(zhǔn)品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用；本試劑盒對(duì)于SOD的檢測(cè)并不需要SOD作為標(biāo)準(zhǔn)品，但可以使用SOD標(biāo)準(zhǔn)品作為陽性對(duì)照或作為對(duì)SOD活性定量的參考。

3. 樣品測(cè)定：

a. 參考下表使用96孔板加入各個(gè)組分，注意設(shè)置樣品孔和各種空白對(duì)照孔。

注意：加入反應(yīng)啟動(dòng)工作液后反應(yīng)即會(huì)開始，可以在低溫操作或用排槍操作以減小各孔間因加入反應(yīng)啟動(dòng)工作液的時(shí)間先后差異而導(dǎo)致的誤差。

b. 37℃孵育30分鐘。

說明：孵育25至35分鐘檢測(cè)出來的SOD活力無顯著差異，但為保證檢測(cè)結(jié)果的一致性，推薦孵育30分鐘。

c. 450nm 測(cè)定吸光度。如無450nm 濾光片，可以使用420-480nm 的濾光片。也可以使用大于600nm 的波長(zhǎng)作為參考波長(zhǎng)進(jìn)行雙波長(zhǎng)測(cè)定。

4. 樣品中總SOD活力的計(jì)算：

a. 抑制百分率的計(jì)算：

參考如下計(jì)算公式計(jì)算抑制百分率：

抑制百分率＝[(A空白對(duì)照1－A空白對(duì)照2)－(A樣品－A空白對(duì)照3)] / (A空白對(duì)照1－A空白對(duì)照2) × *

如果沒有設(shè)置空白對(duì)照3，則可以把計(jì)算公式簡(jiǎn)化為：

抑制百分率＝(A空白對(duì)照1－A樣品) / (A空白對(duì)照1－A空白對(duì)照2) × *

如果計(jì)算出來的抑制百分率小于30% 或大于70% ，則通常需要把該樣品重新測(cè)定。盡量使樣品的抑制百分率在30-70%范圍內(nèi)。如果測(cè)定出來的抑制百分率偏高，則需適當(dāng)稀釋樣品；如果測(cè)定出來的抑制百分率偏低，則需重新準(zhǔn)備濃度較高的待測(cè)樣品。

b. SOD酶活力單位的定義：在上述化酶藕聯(lián)反應(yīng)體系中抑制百分率為50% 時(shí)，反應(yīng)體系中的SOD酶活力定義為一個(gè)酶活力單位 (unit)。注意：SOD的活力單位的定義方式有很多種，不同的活力單位需根據(jù)其定義的不同進(jìn)行適當(dāng)換算。