自備儀器和用品：

酶標儀、離心機、移液器、96孔板、研缽、冰和蒸餾水

公司產(chǎn)品僅用于科研產(chǎn)品屬性：

粗酶液提?。?/span>

1、細菌、細胞或組織樣品的制備：

細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細菌或細胞數(shù)量（104個）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1ml提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

2、血清（漿）樣品：直接檢測。

測定步驟：

1、 酶標儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至450nm。

2、 試劑三的稀釋：將試劑三用蒸餾水稀釋50倍，用多少配多少。（試劑三和蒸餾水1：49稀釋。

3、 工作液配制：在試劑一加入100μl試劑二，充分混勻。配好的試劑4℃避光可保存一周。（若一次性測定樣本較少，可按照實際用量將試劑一和試劑二按照20ml：0.1ml的比例混勻配制）

4、 將一瓶試劑四用5ml蒸餾水溶解（溶解后一周內(nèi)用完）。

5、 樣本測定

注意事項

1、試劑三為酶，不可冷凍，使用時在冰上放置。

2、對照管只需要做一管。

3、SOD為什么有的樣本測定管大于對照管，對照管數(shù)值在什么范圍？

對照管的范圍是0.4-1。對照管吸光值過低可能是（1）試劑三活性低，可以適當減少稀釋倍數(shù)；（2)沒有按順序加試劑；（3）反應(yīng)時間不夠，可以延長反應(yīng)時間（反應(yīng)時間30min可以延長到40min）。對照管吸光值過高可能是試劑三未按操作說明書稀釋相應(yīng)倍數(shù)。

若出現(xiàn)測定管大于對照管，可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大，為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測，通?？梢允箿y定正常。計算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。

操作步驟：

1. 樣品的準備：

a. 細胞樣品的準備：收集細胞，用4 ℃或冰浴預(yù)冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預(yù)冷組織細胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心，取上清作為待測樣品。

b. 組織樣品的準備：動物用生理鹽水(0.9% NaCl ，含有0.16mg/ml肝素鈉) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細胞裂解液比例， 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心，取上清作為待測樣品。

c. 使用BCA蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個活力單位左右(不同細胞和組織的差異會比較大，該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準備20-100 ug蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測。

d. 根據(jù)蛋白濃度和預(yù)計的蛋白使用量，用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液適當稀釋樣品。例如，小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準備好的樣品如果當天測定，可以冰浴保存；如果當天不能完成測定，可以-70 ℃凍存，但建議盡量當天完成測定。

2. 試劑盒的準備工作：

a. WST-8酶工作液的配制： 參照下表，根據(jù)待檢測樣品(包括標準品) 數(shù)量，配制適量WST-8酶工作液，配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存，可當天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。

注意：由于酶溶液的用量較少且易沉降，必須注意在使用前先輕輕離心一下，然后適當混勻后再使用。

b. 反應(yīng)啟動工作液配制：將試劑盒提供的反應(yīng)啟動液 (40X) 溶解后混勻，按1μl 反應(yīng)啟動液(40X) 加入39μl SOD 檢測緩沖液的比例進行稀釋，即為反應(yīng)啟動工作液。4℃或冰浴保存，可當天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。

c. (可選做) SOD 標準品準備：需自備SOD標準品，用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標準品稀釋至如下系列濃度：20U/ml，10U/ml ，5U/ml，2.5U/ml，1.25U/ml，0.625U/ml。在隨后的檢測中可以各取20微升，參考樣品進行檢測。說明：為避免稀釋后SOD酶活性的下降， SOD標準品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用；本試劑盒對于SOD的檢測并不需要SOD作為標準品，但可以使用SOD標準品作為陽性對照或作為對SOD活性定量的參考。

3. 樣品測定：

a. 參考下表使用96孔板加入各個組分，注意設(shè)置樣品孔和各種空白對照孔。

注意：加入反應(yīng)啟動工作液后反應(yīng)即會開始，可以在低溫操作或用排槍操作以減小各孔間因加入反應(yīng)啟動工作液的時間先后差異而導(dǎo)致的誤差。

b. 37℃孵育30分鐘。

說明：孵育25至35分鐘檢測出來的SOD活力無顯著差異，但為保證檢測結(jié)果的一致性，推薦孵育30分鐘。

c. 450nm 測定吸光度。如無450nm 濾光片，可以使用420-480nm 的濾光片。也可以使用大于600nm 的波長作為參考波長進行雙波長測定。

4. 樣品中總SOD活力的計算：

a. 抑制百分率的計算：

參考如下計算公式計算抑制百分率：

抑制百分率＝[(A空白對照1－A空白對照2)－(A樣品－A空白對照3)] / (A空白對照1－A空白對照2) × *

如果沒有設(shè)置空白對照3，則可以把計算公式簡化為：

抑制百分率＝(A空白對照1－A樣品) / (A空白對照1－A空白對照2) × *

如果計算出來的抑制百分率小于30% 或大于70% ，則通常需要把該樣品重新測定。盡量使樣品的抑制百分率在30-70%范圍內(nèi)。如果測定出來的抑制百分率偏高，則需適當稀釋樣品；如果測定出來的抑制百分率偏低，則需重新準備濃度較高的待測樣品。

b. SOD酶活力單位的定義：在上述化酶藕聯(lián)反應(yīng)體系中抑制百分率為50% 時，反應(yīng)體系中的SOD酶活力定義為一個酶活力單位 (unit)。注意：SOD的活力單位的定義方式有很多種，不同的活力單位需根據(jù)其定義的不同進行適當換算。

腫瘤特異性移植抗原(TSTA)試劑盒 哈帕卜寧 分析標準品5-氨鄰酚 97%

腫瘤特異性移植抗原(TSTA)試劑盒 海柯皂苷元聚乙烯硫鹽 平均分子量 Mw ~170,0002-氨-4-二苯 97%

足標記蛋白/足盂蛋白(PCX)試劑盒海藻糖5-磷酰核糖-1-焦磷鈉鹽 80%2-氨-2'-二苯 97%

足標記蛋白/足盂蛋白(PCX)試劑盒亥茅酚苷菊酯 分析標準品AE-活性酯 97%

癌易感蛋白1(BRCA-1)試劑盒含羞草素無水亞硫 CP，98.0%二硫化二苯并噻唑 98%

癌易感蛋白1(BRCA-1)試劑盒漢防己素哌啶 Standard for GC, ≥99.5% (GC)5-硝-2-酚 98%

T急性淋巴母白血病相關(guān)抗原(TALLA-1/CD231)試劑盒漢黃芩苷仲班 99%2-苯氧苯 99%

T急性淋巴母白血病相關(guān)抗原(TALLA-1/CD231)試劑盒漢黃芩素菲啰 97%4-氨二苯 98%

核仁形成區(qū)嗜銀蛋白(Ag-NORs)試劑盒旱蓮苷AP1,P5-二(腺苷5′)五磷五鈉鹽 96%1,8-二氨萘 97%

核仁形成區(qū)嗜銀蛋白(Ag-NORs)試劑盒旱蓮苷D一乙酯 99%1,5-二硝萘 97%

硫氧化還原蛋白(Trx)試劑盒蒿本內(nèi)酯1-(4-吡啶)哌 97%鹽聯(lián)苯 AR,99.0%

硫氧化還原蛋白(Trx)試劑盒蒿鄰-(2,3,4,5,6-五氟芐)羥鹽鹽 99%,用于GC鹽乙二 AR,99%

窖蛋白(Cav-1)試劑盒蒿乙鄰-(2,3,4,5,6-五氟芐)羥鹽鹽 98%鹽乙二 CP,98.0%

窖蛋白(Cav-1)試劑盒訶子林鞣DL-3-苯-2-羥 ≥98.0%赤磷 AR,98.5%

普通急性淋巴白血病抗原(CALLA)試劑盒 訶子林鞣DL(±)-3-氨-3-苯 98%黃磷 AR（劇品）

普通急性淋巴白血病抗原(CALLA)試劑盒 訶子鞣2-苯丁酰 98%黃磷 CP（劇品）
單胺氧化酶(MAO)試劑盒Alexa Fluor 647標記的兔抗雞IgG4-氨安替比林（標準品）Human, Mouse

生物素標記的兔抗雞IgM4-羥（標準品）Human, Mouse

Alexa Fluor 350標記的兔抗雞IgM4-羥芐;對羥苯(標準品)Human, Mouse, Rat

Alexa Fluor 488標記的兔抗雞IgM4-羥間苯二（標準品）Human, Mouse

Alexa Fluor 555標記的兔抗雞IgM4-異丁苯（標準品）Human

Alexa Fluor 647標記的兔抗雞IgM4－[2－（5--2－氧苯酰）－乙]－苯磺...Human, Mouse

PE-Cy5.5標記的兔抗雞IgM4－差向四環(huán)素（標準品）Human, Mouse

PE-Cy7標記的兔抗雞IgM5'-脫氧-5-氟胞苷(5’-DFCR)(標準品)Human

性磷（AP）標記的兔抗雞IgM5-氨水楊,美沙拉秦(標準品)Human, Mouse