詳細(xì)介紹
通用原則:
1,先選擇好探針,然后設(shè)計(jì)引物使其盡可能的靠近于探針。
2, 擴(kuò)增子的長度應(yīng)不超過400bp,理想的能在100-150bp內(nèi),擴(kuò)增片斷約短,有效的擴(kuò)增反應(yīng)就越容易獲得。較短的擴(kuò)增片斷也容易保證分析的一致性
3, 保持GC含量在20%和80%之間,GC富含區(qū)容易產(chǎn)生非特異反應(yīng),從而會導(dǎo)致擴(kuò)增效率的降低,及在SG分析中非特異信號。
4, 為了保證效率和重復(fù)性,應(yīng)避免重復(fù)的核苷酸序列,尤其是G(不能有4個(gè)連續(xù)的G)
5, 將引物和探針互相進(jìn)行配對檢測,以避免二聚體和發(fā)卡結(jié)構(gòu)的形成。
b),探針設(shè)計(jì)指導(dǎo)
1,在設(shè)計(jì)引物之前設(shè)計(jì)探針
2,探針的Tm值應(yīng)在68-70℃之間,如果是目測探針,則要仔細(xì)審查GC富含區(qū)。
3,探針的5’端要避免有鳥氨酸,5’G會有淬滅作用,即使被切割下來這種淬滅作用也還會存在
4,選擇C多于G的鏈作探針,G的含量多于C會降低反應(yīng)效率,這時(shí)就應(yīng)選擇配對的另一條鏈作為探針。
6, 探針應(yīng)盡可能的短,不要超過30個(gè)bp。
7, 檢測探針的DNA折疊和二級結(jié)構(gòu)。
產(chǎn)品名稱 | 瘧原蟲通用探針法熒光定量PCR試劑盒 |
英文名稱 | Plasmodium spp. |
編號 | BJP2775 |
產(chǎn)品特點(diǎn):
全新的熱啟動(dòng)DNA聚合酶-Hot Start Taq DNA聚合酶,可在PCR反應(yīng)的過程中抑制非特異擴(kuò)增,從而最大限度地減少非特異性擴(kuò)增產(chǎn)物的產(chǎn)生,提高熒光定量PCR反應(yīng)的特異性;
采用新型的熒光染料EvaGreen,與傳統(tǒng)熒光染料相比,對PCR反應(yīng)抑制更小,而且熒光信號更強(qiáng),檢測靈敏度更高;
含有UNG的試劑盒可以防止PCR產(chǎn)物污染體系,進(jìn)而有效防止實(shí)驗(yàn)過程中PCR產(chǎn)物的交叉污染;
TaqMan熒光定量PCR試劑盒提供了除引物、探針、模板外的所有實(shí)驗(yàn)所需組分,并配備2×Buffer,可完成不同類型熒光探針的實(shí)時(shí)熒光定量PCR反應(yīng),方便用戶使用;
試劑盒的通用性強(qiáng),可適用于Roche的Light Cycler、ABI各型實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀和。
服務(wù)流程:
1.客戶認(rèn)真寫好訂單,提供待檢基因相關(guān)信息;
2.簽訂技術(shù)服務(wù)合同,支付預(yù)付款(30-50%);
3.設(shè)計(jì)合成定量PCR引物(或客戶提供文獻(xiàn)引物委托本公司合成);
4.DNA/RNA的抽提、定量、RNA反轉(zhuǎn)錄;
5.PCR預(yù)實(shí)驗(yàn),主要檢測引物的特異性和擴(kuò)增效率;
6.正式定量實(shí)驗(yàn):對所有樣品上機(jī)檢測;
7.實(shí)驗(yàn)結(jié)果和數(shù)據(jù)分析,形成報(bào)告。
原理:
瘧原蟲通用探針法熒光定量PCR試劑盒所謂實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù),是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號積累實(shí)時(shí)監(jiān)測整個(gè)PCR進(jìn)程,最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。
檢測方法
1.SYBRGreenⅠ法:
在PCR反應(yīng)體系中,加入過量SYBR熒光染料,SYBR熒光染料特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后,發(fā)射熒光信號,而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號,從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。
SYBR定量PCR擴(kuò)增熒光曲線圖
PCR產(chǎn)物熔解曲線圖
2.TaqMan探針法:
探針完整時(shí),報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號被淬滅基團(tuán)吸收;PCR擴(kuò)增時(shí),Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解,使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離,從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號,即每擴(kuò)增一條DNA鏈,就有一個(gè)熒光分子形成,實(shí)現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物的形成*同步。
以下是公司*產(chǎn)品:
香蘭素小鼠脊髓神經(jīng)元
香蘭素小鼠狀腺成纖維細(xì)胞
香蘭素小鼠狀腺上皮細(xì)胞
鉬酸鈉小鼠角膜基質(zhì)細(xì)胞
鉬酸鈉小鼠角膜上皮細(xì)胞
酚酞二磷酸四鈉鹽小鼠角質(zhì)形成細(xì)胞
酚酞二磷酸四鈉鹽小鼠結(jié)腸成纖維細(xì)胞
無水磷酸肌酸二鈉鹽小鼠結(jié)腸平滑肌細(xì)胞
無水磷酸肌酸二鈉鹽小鼠結(jié)腸粘膜上皮細(xì)胞
無水磷酸肌酸二鈉鹽小鼠結(jié)膜成纖維細(xì)胞硝苯吡啶EJ抗體/抗甘氨酰tRNA合成酶抗體檢測試劑盒
D-綿子糖Egl九同源物1檢測試劑盒
諾氟沙星EB病毒早期抗原檢測試劑盒
瑞替加濱EB病毒衣殼抗原檢測試劑盒
鹽酸沙拉沙星EB病毒衣殼抗原檢測試劑盒
低聚果糖EB病毒核抗原3A抗體檢測試劑盒
瑞格列奈EB病毒核抗原3A抗體檢測試劑盒
酮酸EB病毒核抗原1檢測試劑盒
膠霉毒素EB病毒IgA檢測試劑盒
黃苷-5'-單磷酸鈉EB病毒檢測試劑盒