由基因、蛋白質(zhì)和代謝物的隨機(jī)表達(dá)引起的細(xì)胞異質(zhì)性是細(xì)胞生物學(xué)的關(guān)鍵組成部分,但是,大細(xì)胞群體測序往往掩蓋了細(xì)胞間差異。
單細(xì)胞測序技術(shù)是指在單個細(xì)胞水平上,對基因組、轉(zhuǎn)錄組、表觀遺傳學(xué)組進(jìn)行高通量測序分析的一項(xiàng)新技術(shù)。它能夠揭示單個細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)和基因表達(dá)狀態(tài),非常有利于反映細(xì)胞間的異質(zhì)性,在腫瘤、發(fā)育生物學(xué)、微生物學(xué)、神經(jīng)科學(xué)等各個領(lǐng)域發(fā)揮著重要的作用。
上海單細(xì)胞分離是單細(xì)胞測序中困難的步驟之一,單細(xì)胞分離過程復(fù)雜,操作繁瑣,并且花費(fèi)巨大,這使得單細(xì)胞測序的發(fā)展受到了限制。近年來,隨著單細(xì)胞分離技術(shù)的不斷革新,顯著降低了細(xì)胞損失和運(yùn)行成本,提高了單細(xì)胞捕獲的速度和精確度。
單細(xì)胞分離技術(shù)的不斷革新和完善使得單細(xì)胞測序成為生命科學(xué)的焦點(diǎn)之一。單細(xì)胞分離過程復(fù)雜,我們該如何選擇呢?
目前,從異質(zhì)性的細(xì)胞群體中分離單細(xì)胞的技術(shù)主要有口吸管技術(shù)、極限稀釋法、激光捕獲顯微切割技術(shù)、熒光流式細(xì)胞分選法、微流控技術(shù)、納米孔過濾法等。
其中,極限稀釋法和顯微操作法等都屬于低通量的高勞動密集型上海單細(xì)胞分離方式,而流式分選技術(shù)可以較為穩(wěn)定地、自動化地獲得單個細(xì)胞,很大程度上推動了高通量單細(xì)胞測序技術(shù)的發(fā)展。
近期開發(fā)的微流控技術(shù),包括基于閥、液滴和納米芯片方式的開發(fā),使以低成本方法同時對數(shù)千乃至數(shù)萬級別單個細(xì)胞進(jìn)行測序成為可能,也逐漸將單細(xì)胞測序推向第三代測序的時代。