化工儀器網(wǎng)
詳細介紹
商品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
中量血漿RNA磁珠法提取試劑盒(M) | 15T | A-Tq3108 |
中量血漿RNA磁珠法提取試劑盒(M) | 30T | A-Tq3108 |
PCR 反應(yīng)需要使用哪些試劑和設(shè)備？
試劑:
模板DNA：PCR反應(yīng)需要模板DNA，如從細胞、組織、血液中提取DNA等；引物：PCR反應(yīng)的兩個引物，分別與模板DNA的兩端配對擴增所需的特定區(qū)域，引物也可以合成為TA克隆等過程中使用到的引物；dNTPs：PCR反應(yīng)中需要四種dNTPs，包括脫氧腺苷酸（dATP）、脫氧胸苷酸（dCTP）、脫氧鳥苷酸（dGTP）、脫氧胞嘧啶酸（dTTP），用于細胞分裂、DNA合成等生物學(xué)過程，用于PCR擴增的模板DNA鏈的延伸和擴增；Taq DNA聚合酶：PCR反應(yīng)需要的聚合酶，一般使用Taq聚合酶，還有一些其他種類的聚合酶如PFU、Phusion等，用于擴增DNA鏈；PCR buffer溶液：對PCR反應(yīng)具有緩沖作用，調(diào)節(jié)反應(yīng)pH，硫代硫酸氫鹽SDS、小分子有機化合物如甲醛，可增強PCR反應(yīng)特異性，從而提高反應(yīng)效率；酶切體系：PCR擴增往往涉及到重組、構(gòu)建和測序等等實驗步驟，常常需要進行酶切操作。MARK:一種分子量標(biāo)準，用來判別DNA片段大小的工具。DNA純化試劑盒：用于純化PCR反應(yīng)產(chǎn)物；
設(shè)備：
PCR儀：用于控制反應(yīng)溫度，保證PCR反應(yīng)時不同溫度環(huán)節(jié)的嚴格控制；電泳槽：用于分離PCR擴增產(chǎn)物；核酸提取儀：從組織樣本中全自動提取核酸。 這些試劑和設(shè)備在PCR分子生物學(xué)技術(shù)中均是，只有在有序齊全的基礎(chǔ)上，才能進行PCR反應(yīng)并得出準確結(jié)果。
PCR相關(guān)基礎(chǔ)實驗：
PCR反應(yīng)基本步驟一般的聚合酶鏈式反應(yīng)由20到35個循環(huán)組成，每個循環(huán)包括以下3個步驟：
一、變性：
利用高溫（93-98℃）使雙鏈DNA分離。高溫將連接兩條DNA鏈的氫鍵打斷。在第一個循環(huán)之前，通常加熱長一些時間以確保模板和引物分離，僅以單鏈形式存在。該步驟時間1-2分鐘，接下來PCR儀就控制溫度進入循環(huán)階段。
二、退火或稱接合,復(fù)性：
在DNA雙鏈分離后，降低溫度使得引物可以結(jié)合于單鏈DNA上。此階段的溫度通常低于引物熔點5℃。錯誤的退火溫度可能導(dǎo)致引物不與模板結(jié)合或者錯誤地結(jié)合。該步驟時間1-2分鐘。
三、延伸：
DNA聚合酶由降溫時結(jié)合上的引物開始沿著DNA鏈合成互補鏈。此階段的溫度依賴于DNA聚合酶。該步驟時間依賴于聚合酶以及需要合成的DNA片段長度。傳統(tǒng)的Taq估計合成1000bp/min、較新的Tbr（來自于嗜熱菌Thermus brockianus）約40秒、商業(yè)公司生產(chǎn)的融合型聚合酶僅需約10-15秒。
PCR反應(yīng)條件優(yōu)化：
1、變性溫度和時間：
保證模板DNA解鏈是保證整個PCR擴增成功的關(guān)鍵。加熱90~95°C, 30~60s，再復(fù)雜的DNA 分子也可變性為單鏈。溫度過高或高溫持續(xù)時間過長，可對Taq酶活性和dNTP分子造成損害。
2、復(fù)性溫度和時間:
PCR擴增特異性取決于復(fù)性過程中引物與模板的結(jié)合。復(fù)性溫度越高，產(chǎn)物特異性越高。復(fù)性溫度越低，產(chǎn)物特異性越低。需根據(jù)引物的Tm值具體設(shè)定。
3、延伸溫度和時間:
一般位于Taq酶最適作用溫度70~75°C之間。引物小于16個核苷酸時，過高的延伸溫度不利于引物與模板的結(jié)合，可以緩慢升溫到70~75°C。延伸反應(yīng)時間，可根據(jù)待擴增片段的長度而定，小于1kb, 1min足夠；大于1kb需加長延伸時間。Taq酶可根據(jù)1kb/min增加時間。這里需要注意，延伸時間過長可能出現(xiàn)非特異擴增。因此需要設(shè)置恰到好處的延伸時間。
4、循環(huán)數(shù):
其他參數(shù)選定后，PCR循環(huán)次數(shù)主要取決于模板DNA的濃度。理論上說20?25次循環(huán)后，PCR產(chǎn)物的積累即可達到最大值，實際操作中由于每步反應(yīng)的產(chǎn)率不可能達到100%，因此不管模板濃度是多少，20~30次是比較合理的循環(huán)次數(shù)。循環(huán)次數(shù)越多，非特異擴增增加。
公司正在出售的產(chǎn)品：
庫皮科斯病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒 | CD44變體6ELISA試劑盒 CD44-v6免費代測試劑 | 乙型肝炎病毒X蛋白探針法熒光定量PCR試劑盒 |
流感嗜血桿菌PCR檢測試劑盒說明書 | 二酰甘油-O-?；D(zhuǎn)移同源物2ELISA試劑盒 DGAT2免費代測試劑 | 多瘤病毒PCR檢測試劑盒供應(yīng) |
箭毒蛙壺菌探針法熒光定量PCR試劑盒 | Discs大同源物3ELISA試劑盒 | 蠟樣桿菌sleL基因(110bp)常規(guī)PCR檢測試劑盒 |
水稻內(nèi)源基因PCR檢測試劑盒 | 泛分解ELISA試劑盒 | 狂犬病病毒通用染料法熒光定量RT-PCR試劑盒 |
鳥類多瘤病毒探針法熒光定量PCR試劑盒 | 非小細胞肺癌抗原ELISA試劑盒 | 馬皮疽組織胞漿菌探針法熒光定量PCR試劑盒 |
擬無枝菌菌通用染料法熒光定量PCR試劑盒 | 分揀連接蛋白7ELISA試劑盒 | 腸道病毒EV71/柯薩奇病毒CA16核檢測試劑盒 |
擬無枝菌菌通用PCR檢測試劑盒 | 輔肌動蛋白α3ELISA試劑盒 | 人副流感病毒4B型染料法熒光定量RT-PCR試劑盒 |
鳥分枝桿菌類結(jié)核亞型PCR檢測試劑盒 | 鈣蛋白9ELISA試劑盒 | 金葡萄球菌核檢測試劑盒 |
嚙蝕艾肯菌探針法熒光定量PCR試劑盒 | 鈣依賴性胞漿型磷脂A2ELISA試劑盒 | 犬新孢子蟲PCR檢測試劑盒供應(yīng) |
黏孢子蟲屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒 | 干擾α10ELISA試劑盒 | 蠟桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒 |
貓細小病毒（貓泛白細胞減少癥、貓瘟）探針法熒光定量PCR試劑盒 | 人β淀粉樣多肽42(Aβ 42)試劑盒ELISA | 人博卡病毒PCR檢測試劑盒（熒光PCR法） |
麥芽染料法PCR鑒定試劑盒 | 人血清白蛋白(HSA)elisa試劑盒 | 萹蓄染料法PCR鑒定試劑盒 |
枇杷葉染料法PCR鑒定試劑盒 | 人MAP磷雙特異性磷1(DUSP-1)ELISA檢測試劑盒 | 偽中間型葡萄球菌PCR檢測試劑盒 |
綿羊星狀病毒通用PCR檢測試劑盒 | 人表皮角蛋白(EK) ELISA試劑盒 | 中量血漿RNA磁珠法提取試劑盒(M)人乳頭瘤病毒18探針法熒光定量PCR試劑盒 |
伯氏疏螺旋體探針法熒光定量PCR試劑盒 | 人二級淋巴組織趨化因子(SLC/CCL21) ELISA試劑盒 | 人類嗜淋巴細胞病毒通用PCR檢測試劑盒 |
化工儀器網(wǎng)