化工儀器網(wǎng)
詳細介紹
公司產(chǎn)品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷！
描述： 核酸外切酶 III 來源于 E.coli，具有 3′-5′外切酶活性，它作用于雙鏈 DNA，從 3′ OH 末端方向逐步切去單核苷酸；每次酶與底物結(jié)合催化，只有幾個核苷酸被除掉，從而在 DNA 分子群內(nèi)產(chǎn)生漸進缺失。該酶的最佳底物為平末端、5′突出末端雙鏈 DNA 分子，但也可作用于雙鏈 DNA 的缺刻處，從 3′降解 DNA 分子，釋放 5′單核苷酸。對于 3′突出末端，尤其是多于 4nt 的幾乎不切割, 亦不能切割硫代磷酰脂鍵。核酸外切酶 III 的活性部分依賴螺旋結(jié)構(gòu)，并根據(jù)序列的不同 而有差異（C＞A=T＞G）。另外，核酸外切酶 III 還具有脫嘌呤/嘧啶-核酸內(nèi)切酶活性、RnaseH 活性和 3′磷酸酶活性。
活性定義：50 μl 反應(yīng)體系中，37℃ 條件下，30 分鐘
催化 E.coli DNA 產(chǎn)生 1 nmol 酸可溶性產(chǎn)物所需要的量定義為一個活性單位。
應(yīng)用： 非定向巢式缺失定點突變鏈特異性探針的制備
制備用于雙脫氧測序的單鏈底模板
熱失活：70°C，20min。
1X Exonuclease III Buffer: 10 mM Bis-Tris（pH 7.0），10
mM MgCl2，1 mM DTT。
酶儲存液：50 mM Tris-HCl (pH 8.0), 50 mM KCl, 1 mM
DTT, 25% Glycerol.
儲存：置于-20°C 可保存 2 年，避免反復(fù)凍融。
活性定義：50 μl 反應(yīng)體系中，37℃ 條件下，30 分鐘
催化 E.coli DNA 產(chǎn)生 1 nmol 酸可溶性產(chǎn)物所需要的量定義為一個活性單位。
應(yīng)用： 非定向巢式缺失定點突變鏈特異性探針的制備
制備用于雙脫氧測序的單鏈底模板
熱失活：70°C，20min。
1X Exonuclease III Buffer: 10 mM Bis-Tris（pH 7.0），10
mM MgCl2，1 mM DTT。
酶儲存液：50 mM Tris-HCl (pH 8.0), 50 mM KCl, 1 mM
DTT, 25% Glycerol.
儲存：置于-20°C 可保存 2 年，避免反復(fù)凍融。
貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
A-PJ1126 | Exonuclease III | 5000U |
PCR 反應(yīng)需要使用哪些試劑和設(shè)備？
試劑:
模板DNA：PCR反應(yīng)需要模板DNA，如從細胞、組織、血液中提取DNA等；引物：PCR反應(yīng)的兩個引物，分別與模板DNA的兩端配對擴增所需的特定區(qū)域，引物也可以合成為TA克隆等過程中使用到的引物；dNTPs：PCR反應(yīng)中需要四種dNTPs，包括脫氧腺苷酸（dATP）、脫氧胸苷酸（dCTP）、脫氧鳥苷酸（dGTP）、脫氧胞嘧啶酸（dTTP），用于細胞分裂、DNA合成等生物學(xué)過程，用于PCR擴增的模板DNA鏈的延伸和擴增；Taq DNA聚合酶：PCR反應(yīng)需要的聚合酶，一般使用Taq聚合酶，還有一些其他種類的聚合酶如PFU、Phusion等，用于擴增DNA鏈；PCR buffer溶液：對PCR反應(yīng)具有緩沖作用，調(diào)節(jié)反應(yīng)pH，硫代硫酸氫鹽SDS、小分子有機化合物如甲醛，可增強PCR反應(yīng)特異性，從而提高反應(yīng)效率；酶切體系：PCR擴增往往涉及到重組、構(gòu)建和測序等等實驗步驟，常常需要進行酶切操作。MARK:一種分子量標準，用來判別DNA片段大小的工具。DNA純化試劑盒：用于純化PCR反應(yīng)產(chǎn)物；
設(shè)備：
PCR儀：用于控制反應(yīng)溫度，保證PCR反應(yīng)時不同溫度環(huán)節(jié)的嚴格控制；電泳槽：用于分離PCR擴增產(chǎn)物；核酸提取儀：從組織樣本中全自動提取核酸。 這些試劑和設(shè)備在PCR分子生物學(xué)技術(shù)中均是，只有在有序齊全的基礎(chǔ)上，才能進行PCR反應(yīng)并得出準確結(jié)果。
PCR相關(guān)基礎(chǔ)實驗：
PCR反應(yīng)基本步驟一般的聚合酶鏈式反應(yīng)由20到35個循環(huán)組成，每個循環(huán)包括以下3個步驟：
一、變性：
利用高溫（93-98℃）使雙鏈DNA分離。高溫將連接兩條DNA鏈的氫鍵打斷。在第一個循環(huán)之前，通常加熱長一些時間以確保模板和引物分離，僅以單鏈形式存在。該步驟時間1-2分鐘，接下來PCR儀就控制溫度進入循環(huán)階段。
二、退火或稱接合,復(fù)性：
在DNA雙鏈分離后，降低溫度使得引物可以結(jié)合于單鏈DNA上。此階段的溫度通常低于引物熔點5℃。錯誤的退火溫度可能導(dǎo)致引物不與模板結(jié)合或者錯誤地結(jié)合。該步驟時間1-2分鐘。
三、延伸：
DNA聚合酶由降溫時結(jié)合上的引物開始沿著DNA鏈合成互補鏈。此階段的溫度依賴于DNA聚合酶。該步驟時間依賴于聚合酶以及需要合成的DNA片段長度。傳統(tǒng)的Taq估計合成1000bp/min、較新的Tbr（來自于嗜熱菌Thermus brockianus）約40秒、商業(yè)公司生產(chǎn)的融合型聚合酶僅需約10-15秒。
PCR反應(yīng)條件優(yōu)化：
1、變性溫度和時間：
保證模板DNA解鏈是保證整個PCR擴增成功的關(guān)鍵。加熱90~95°C, 30~60s，再復(fù)雜的DNA 分子也可變性為單鏈。溫度過高或高溫持續(xù)時間過長，可對Taq酶活性和dNTP分子造成損害。
2、復(fù)性溫度和時間:
PCR擴增特異性取決于復(fù)性過程中引物與模板的結(jié)合。復(fù)性溫度越高，產(chǎn)物特異性越高。復(fù)性溫度越低，產(chǎn)物特異性越低。需根據(jù)引物的Tm值具體設(shè)定。
3、延伸溫度和時間:
一般位于Taq酶最適作用溫度70~75°C之間。引物小于16個核苷酸時，過高的延伸溫度不利于引物與模板的結(jié)合，可以緩慢升溫到70~75°C。延伸反應(yīng)時間，可根據(jù)待擴增片段的長度而定，小于1kb, 1min足夠；大于1kb需加長延伸時間。Taq酶可根據(jù)1kb/min增加時間。這里需要注意，延伸時間過長可能出現(xiàn)非特異擴增。因此需要設(shè)置恰到好處的延伸時間。
4、循環(huán)數(shù):
其他參數(shù)選定后，PCR循環(huán)次數(shù)主要取決于模板DNA的濃度。理論上說20?25次循環(huán)后，PCR產(chǎn)物的積累即可達到最大值，實際操作中由于每步反應(yīng)的產(chǎn)率不可能達到100%，因此不管模板濃度是多少，20~30次是比較合理的循環(huán)次數(shù)。循環(huán)次數(shù)越多，非特異擴增增加。
公司正在出售的產(chǎn)品：
人免疫缺陷病毒1型M群G型染料法熒光定量RT-PCR試劑盒 | β2轉(zhuǎn)鐵蛋白ELISA試劑盒 β2TF免費代測試劑 | 人腺病毒D91型探針法熒光定量PCR試劑盒 |
鴨乙型肝炎病毒PCR檢測試劑盒直銷 | 蛋白激活復(fù)合體亞基2ELISA試劑盒 PSME2免費代測試劑 | 絲狀支原體山羊亞種PCR檢測試劑盒說明書 |
鵝源性成分(Goose)核檢測試劑盒 | 細胞色P450c21B/21-羥化ELISA試劑盒 | 馬傳染性貧血（EIAV）核檢測試劑盒 |
流行性出血熱漢坦病毒PCR檢測試劑盒 | 低氧誘導(dǎo)因子2ELISA試劑盒 | 馬勃探針法PCR鑒定試劑盒 |
牦牛源性成分染料法熒光定量PCR試劑盒 | 多巴胺脫羧ELISA試劑盒 | 產(chǎn)腸毒性大腸桿菌O139血清型探針法熒光定量PCR試劑盒 |
皰疹病毒探針法熒光定量PCR試劑盒 | 多型性腺瘤基因樣蛋白1ELISA試劑盒 | 弧菌O1(VC O1)核檢測試劑盒 |
佩氏著色霉PCR檢測試劑盒 | 二肽基肽6ELISA試劑盒 | 禽呼腸孤病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒 |
毛癬菌通用PCR檢測試劑盒 | 泛交叉反應(yīng)蛋白ELISA試劑盒 | 蠟樣桿菌毒腹瀉型和嘔吐型PCR檢測試劑盒（熒光PCR法） |
貓支原體（MF）PCR檢測試劑盒（熒光-PCR法） | 防御β119ELISA試劑盒 | 佩蘭染料法PCR鑒定試劑盒 |
諾卡菌通用PCR檢測試劑盒 | 分揀連接蛋白9ELISA試劑盒 | 麻風(fēng)桿菌(ML)核檢測試劑盒 |
龍眼肉染料法PCR鑒定試劑盒 | 人催乳釋放激(PRH)ELISA試劑盒 | 禽類肉瘤病毒PCR檢測試劑盒 |
擬枝孢鐮刀菌PCR檢測試劑盒說明書 | 人羥脯氨(Hyp)ELISA檢測試劑盒 | 流感嗜血桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒 |
附紅細胞體（嗜血支原體）屬通用染料法熒光定量PCR試劑盒 | Exonuclease III人白介2受體(IL2R)試劑盒ELISA | 羅斯河病毒PCR檢測試劑盒 |
結(jié)核分枝桿菌PCR檢測試劑盒 | 人γ干擾誘導(dǎo)單核細胞因子(MIGF/CXCL9)ELISA試劑盒 | 兔附紅細胞體探針法熒光定量PCR試劑盒 |
鴨源性成分Cytb基因(Duck-Cytb)檢測試劑盒 | 人單純皰疹病毒Ⅰ+Ⅱ型(HSVⅠ+Ⅱ)抗體(IgG)檢測試劑盒elisa | 病毒N8亞型(AIV-N8)核檢測試劑盒 |
化工儀器網(wǎng)