農(nóng)殘試劑使用方法:請按照方法GB/T 5009.199-2003操作,或根據(jù)農(nóng)藥殘留測試儀的使用說明進行測試。
1、農(nóng)殘試劑使用方法
取2g果蔬樣品(塊莖類取4g),葉菜剪成1cm左右見方的碎片,塊莖類取橫截面樣品或取其表皮,放入三角瓶中,加入10mL緩沖液,振蕩1~2min ,倒出提取液,靜置2min,待測。若提取液混濁或雜質(zhì)太多可過濾后再測。
2、農(nóng)殘試劑測試
對照測試:于反應(yīng)瓶中加入2.5mL緩沖液,再分別加入100μL酶液和顯色劑,混勻,靜置反應(yīng)10min后加入100μL底物,搖勻并立即倒入比色杯中,及時放入儀器的測量室第1通道,合上蓋。按鍵,顯示屏下方延遲10s后,測量時間開始倒計時180s,計時完畢,顯示屏顯示吸光度增量及抑制率。在進行對照測試時,2~8通道可同時進行樣品測試。
樣品測試:于反應(yīng)瓶中加入2.5mL待測液,再分別加入100μL酶液和顯色劑,混勻,靜置反應(yīng)10min后加入100μL底物,搖勻并立即倒入比色杯中,及時放入儀器的測量室通道,合上蓋。按
鍵,顯示屏下方延遲10s后,測量時間開始倒計時180s,計時完畢,顯示屏顯示吸光度增量及抑制率。數(shù)據(jù)自動保存,如有需要按鍵打印。
3、農(nóng)殘試劑結(jié)果判定
以分光光度計測試(412 nm波長)時,按下式計算抑制率:
抑制率(%)=[(ΔΑ0-ΔΑt )/ΔΑ0]×100
以農(nóng)藥殘留快速測試儀檢測時其抑制率一般可自動計算。若樣品抑制率≥50%,表示樣品農(nóng)殘超標(biāo),為陽性結(jié)果。陽性結(jié)果的樣品需做2次以上重復(fù)檢測,多次檢測仍呈陽性需用氣相色譜等儀器做進一步確認。
農(nóng)藥殘留檢測試劑盒實驗原理:
本試劑盒采用競爭elisa方法,在微孔板包被有右旋糖酐偶聯(lián)抗原,加入右旋糖酐標(biāo)準(zhǔn)品或樣品,游離右旋糖酐與微孔條上預(yù)包被的右旋糖酐偶聯(lián)抗原互相競爭抗右旋糖酐抗體酶標(biāo)記物,用 TMB 底物顯色,加入終止液后顏色由藍色變?yōu)辄S色,用酶標(biāo)儀在 450nm 波長下進行檢測,吸光值與樣品中右旋糖酐含量成反比,通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中右旋糖酐的含量。
樣品收集、處理及保存 | 操作步驟 |
1. 細胞培養(yǎng)上清:適用于檢測體外培養(yǎng)的細胞分泌性成份。用無菌管收集細胞上清液,以1000×g離心15分鐘,收集上清。 2. 細胞:用PBS反復(fù)洗滌細胞3次,調(diào)整細胞濃度達到104 -106/ml 左右,通過反復(fù)凍融,使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份,或者細胞超聲粉碎,離心取上清液檢測。 3. 血清:在室溫下,血液自然凝固,以1000×g離心15分鐘,取上清待測。 4. 血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合后靜置10-20 分鐘后,以1000×g離心15分鐘,收集上 清。 5. 體液:包括胸腹水、腦脊液,分泌物等。使用不含熱原和內(nèi)毒素的離心管收集,以1000×g離心15分鐘,收集上清。 6. 組織標(biāo)本:切取組織標(biāo)本,稱取重量0.5mg,加入500ul 的PBS,用手工或勻漿器,或超聲破碎儀將標(biāo)本勻漿,以2000-3000 rmp離心20 分鐘,收集上清進行檢測。 7. 樣品中不能含有NaN3,因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。 8. 保存:如果樣品不能立即檢測,應(yīng)將其分裝,-70 ℃保存,避免反復(fù)冷凍。保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。血液標(biāo)本盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中含大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。 | 1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。 2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。 3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。 4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。 5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。 6.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。 7.溫育:操作同3。 8.洗滌:操作同5。 9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘。 10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。 11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。 |