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可見(jiàn)分光光度計(jì)原理
閱讀：2429 發(fā)布時(shí)間：2019-5-21
可見(jiàn)分光光度計(jì)廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥衛(wèi)生、臨床檢測(cè)、生物化學(xué)、石油化工、環(huán)保監(jiān)測(cè)、食品生產(chǎn)和質(zhì)量控制等部門作定性、定量分析，還可作為大、專院校和中學(xué)相關(guān)課程的教學(xué)演示和實(shí)驗(yàn)儀器。
分光光度計(jì)是目前化驗(yàn)室中使用比較廣泛的一種分析儀器，其測(cè)定原理是利用物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收特性，以較純的單色光作為入射光，測(cè)定物質(zhì)對(duì)光的吸收，從而確定溶液中物質(zhì)的含量。其特點(diǎn)是靈敏度高；準(zhǔn)確度高；測(cè)量范圍廣；在一定條件下，可同時(shí)測(cè)定水樣中兩種或兩種以上的物質(zhì)組分含量等。
分光光度計(jì)按其波長(zhǎng)范圍可分為可見(jiàn)分光光度計(jì)(工作范圍360～800nm)、紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)(工作范圍200～1000nm)和紅外分光光度計(jì)(工作范圍760～400000nm)等。
可見(jiàn)分光光度計(jì)的原理是，當(dāng)一束單色光照射待測(cè)物質(zhì)的溶液時(shí)，當(dāng)某一定頻率(或波長(zhǎng))的可見(jiàn)光所具有的能量(hf)恰好與待測(cè)物質(zhì)分子中的價(jià)電子的能級(jí)差相適應(yīng)(即ΔE=E2-E1=hf)時(shí)，待測(cè)物將對(duì)該頻率(波長(zhǎng))的可見(jiàn)光產(chǎn)生選擇性的吸收。用可見(jiàn)分光光度計(jì)可以測(cè)量和記錄其吸收程度(吸光度)。由于在一定條件下，吸光度A與待測(cè)物質(zhì)的濃度C及吸收地長(zhǎng)度l的乘積成正比，即A=KCL，所以，在測(cè)得吸光度A后，可采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法、比較法以及標(biāo)準(zhǔn)加入法等方法進(jìn)行定量分析。
可見(jiàn)分光光度計(jì)是一種結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)潔、使用方便的單光束分光光度計(jì)，基于樣品對(duì)單色光的選擇吸收特性可用于對(duì)樣品進(jìn)行定性和定量分析。其定量分析根據(jù)相對(duì)測(cè)量原理工作，即選定樣品的溶劑(或空氣)作為標(biāo)準(zhǔn)試樣，設(shè)定其透射比為100%，被測(cè)樣品的透射比則相對(duì)于標(biāo)準(zhǔn)試樣(或空氣)而得到，在一定的濃度范圍，各參量遵循朗伯—比耳定律：A=lg1/T=KCL
T=I/I0
A:吸光度
T:相對(duì)于標(biāo)準(zhǔn)試樣的透射比
I:光透過(guò)被測(cè)樣品后照射到光電傳感器上的強(qiáng)度I0:光透過(guò)標(biāo)準(zhǔn)試樣后照射到光電傳感器上的強(qiáng)度
K:樣品溶液的比消光系數(shù)
L:樣品溶液在光路中的長(zhǎng)度
C:樣品濃度