干貨分享：細胞培養(yǎng)板的選擇與常見問題解答

　　細胞培養(yǎng)板依底部形狀的不同可分為平底和圓底(U型和V型);培養(yǎng)孔的孔數(shù)有6、12、24、48、96、384、1536 孔等;具體選擇時根據(jù)培養(yǎng)細胞的類型、所需培養(yǎng)體積及不同的實驗目的而定。

　　(1)平底和圓底(U型和V型)培養(yǎng)板的區(qū)別和選擇：

　　貼壁細胞一般用平底培養(yǎng)板。懸浮型細胞的培養(yǎng)一般用V型。U型培養(yǎng)板亦多用于培養(yǎng)懸浮型細胞 。V型培養(yǎng)板有時用做免疫學血凝集的實驗。

　　不同型狀的板子自然有不同用途。平底的什么類型的細胞都可用，但當細胞數(shù)目較少，如做克隆時，就用96孔平底板，另外，做MTT等實驗時，無論貼壁和懸浮細胞，一般均用平底板。

　　至于U或V型板，一般在某些特殊要求時才使用。如在免疫學方面，當做兩種不同淋巴細胞混合培養(yǎng)時，需要二者相互接觸以刺激，因此，一般需要U型板，因細胞會由于重力的作用而聚集在一個很小的范圍內。

　　V型板的用途更少，一般用于細胞殺傷實驗時，為了使效靶細胞緊密接觸，常使用V型板，但這種試驗也可用U型板替代(加入細胞后，低速離心)如果是養(yǎng)細胞的話，通常是選用平底的。

　　圓底的好像沒聽說過拿來養(yǎng)細胞。圓底的通常是拿來做分析， 化學反應， 或是保存樣品用的， 因為圓底比較好將液體吸得干凈，如果用平底的就不好吸了。

　　(2)細胞培養(yǎng)常見問題與解答

　　問：我看到培養(yǎng)板有4、6、12、24、48、96孔幾種規(guī)格 ，但不知道到底什么實驗用哪種規(guī)格。

　　答：要根據(jù)你具體的實驗要求，流式一般用6孔，MTT一般用96孔，細胞爬片一般用24孔等，要具體根據(jù)你實驗來定。

　　問：我想測吸光度用酶標儀，用多孔細胞培養(yǎng)板行嗎?請問酶標板多孔細胞培養(yǎng)板有什么區(qū)別?

　　答：用多空細胞培養(yǎng)板測吸光度肯定可以拉，我們經(jīng)常用它來做樣品的蛋白定量和MTT檢測。

　　區(qū)別：酶標板一般要比細胞培養(yǎng)板貴，細胞板主要做細胞培養(yǎng)，但也可以用來測蛋白濃度;酶標板包括包被板和反應板，一般不能用做細胞培養(yǎng)，它主要做免疫酶聯(lián)反應后的蛋白檢測，它需要更高的要求還需要特定的酶標工作液。

　　(3)細胞培養(yǎng)板的密閉和污染問題

　　細胞培養(yǎng)板的加樣和操作：細胞培養(yǎng)板在進行細胞操作時同樣遵循嚴格無菌的原則，各項操作要保證規(guī)范、科學，不對細胞的生長造成額外的影響。這其中最常見的問題就是如何保證加樣后細胞的均勻和盡量減少換液對細胞生長狀態(tài)的影響。

　　問：96，24孔培養(yǎng)板或培養(yǎng)皿的蓋子都很松，這樣是方便了透氣，但是細菌、霉菌等污染物會不會也隨著溜進去呢?

　　答：

　　1. 蓋子很松，屬于半開放培養(yǎng)，這樣的目的是透氣(實際上是為了使培養(yǎng)皿外的co2能夠與培養(yǎng)皿充分交換，維持培養(yǎng)基的pH值)。

　　2. 凡事有利必有弊，這樣當然增加了污染的可能性。此外這樣還會使培養(yǎng)皿內的液體蒸發(fā)，這對于精確定量的藥物來說就顯得值得注意了。所以以下二條措施是必須的：

　　a 培養(yǎng)箱內空氣必須清潔(定期紫外線照，酒精擦洗，盡量少開關培養(yǎng)箱);

　　b 培養(yǎng)箱內的濕度必須始終保持為100%(培養(yǎng)箱內放置無菌蒸餾水的水槽)。

　　就好像培養(yǎng)皿，也是一個蓋倒扣的容器，也不會污染。主要是因為蓋子“L"型邊緣產生氣流負壓的緣故，灰塵上面才附著有微生物，而氣流攜帶的灰塵是無法通過產生負壓的蓋邊緣的。而透氣作用只是通過空氣的擴散，不會產生氣流，所以只會透氣不會透菌。

　　問：我使用24孔板，在其中的某些孔中有操作(在超凈臺內)，而其它孔中還有細胞要培養(yǎng)，我很擔心這樣會污染，不知道要注意什么?大家不知道有什么好的建議。

　　答：在超凈臺內如果操作規(guī)范的話應該可以的，我想你可以充分利用培養(yǎng)版的蓋子，盡量只暴露要操作的孔，將其它孔用蓋子蓋起來。這是我的一點粗淺的見解，拋磚引玉吧!

　　(4)細胞分布不均及解決辦法

　　問：我的細胞接種培養(yǎng)板，細胞總是聚集在周邊部分，該如何處理啊?我看園子里有的戰(zhàn)友的細胞卻是聚集在中間，是不是板子的質量問題啊?

　　答：請問你的細胞是如何混勻的?是滴管吹打還是振蕩培養(yǎng)板?如果是后者，而且是轉圈搖勻的話，很有可能由于離心力的作用使細胞甩到周邊部分，導致細胞中間少，四周多!自己可是試試!

　　(5)6孔板接種和換液問題：

　　問：我的細胞傳代很正常，但一種到六孔板里(不管加藥和對照)，總有兩三個孔(隨機)細胞長得不好，很小，像破碎了。有人遇到過這種情況嗎?到底是啥原因呢?請各位指點

　　答：可能跟你加液的溫度有關。如果你細胞剛剛拿出來換液加液，培養(yǎng)基也是從4度冰箱拿出來不久，很容易細胞就會凍死了。建議你最好把培養(yǎng)基先在培養(yǎng)箱里邊孵育15min先。

　　(6)24孔板接種問題：

　　問：把細胞消化接種到24孔板之后，已經(jīng)四天了，老是每孔的中間部分長不滿，每天換液時都用PBS 清洗，第二天換液時都出現(xiàn)同樣的情況，每孔的邊緣長的很好，中央大量死細胞?我是選擇孔內鋪蓋玻片，在玻片上種植。每次換液都用PBS洗，必要的步驟嗎?另外，也有可能和細胞種類有關或者和培養(yǎng)液有關?

　　答：1. 我想你的培養(yǎng)液可能加的太少了。由于表面張力的作用，培養(yǎng)板的邊緣液體會向上走，造成培養(yǎng)液面呈現(xiàn)一個凹面(就像量筒的液體凹面一樣)，中央的細胞正好在凹面的處，培養(yǎng)液少，細胞的營養(yǎng)不夠，甚至干涸掉，空氣中的氧氣也會造成損傷，即使有增值過來的細胞也會死掉。

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