做ELISA實(shí)驗(yàn)，事先收集好的標(biāo)本需如何處理?

　　做ELISA實(shí)驗(yàn)，在處理樣本應(yīng)該先了解收集樣本的注意事項(xiàng)。

　　【標(biāo)本收集注意事項(xiàng)】

　　1.收集血液的試管應(yīng)為一次性的無(wú)熱原，無(wú)內(nèi)毒素試管。

　　2.血清和血漿避免使用溶血，高血脂標(biāo)本。

　　3.標(biāo)本應(yīng)清澈透明，懸浮物應(yīng)離心去除。

　　4.標(biāo)本收集后若不及時(shí)檢測(cè)，需按一次使用量分裝，凍存于-20℃，-80℃電冰箱內(nèi)，避免反復(fù)凍融。

　　5.可根據(jù)標(biāo)本的實(shí)際情況，做適當(dāng)倍數(shù)稀釋(建議做預(yù)實(shí)驗(yàn)，以確定稀釋倍數(shù)) 。

　　6.收集標(biāo)本，盡量做到雙份的用量，避免一次實(shí)驗(yàn)失敗，重復(fù)實(shí)驗(yàn)時(shí)標(biāo)本缺失，從而耽誤實(shí)驗(yàn)進(jìn)程。

　　7.收集標(biāo)本時(shí)，應(yīng)該做好防護(hù)措施(比如戴手套，口罩，護(hù)目鏡等)，認(rèn)為所有標(biāo)本都具有一定的潛在危險(xiǎn)性。

　　8.樣本處理應(yīng)該在生物安全柜里面，并且正確使用生物安全柜。

　　樣本正確的處理方法應(yīng)該是這樣的：

　　【標(biāo)本處理辦法】

　　1.血清：將采集的全血靜置冰箱4℃過(guò)夜，然后1000-3000rpm離心10分鐘，取上清立即測(cè)試，暫時(shí)不測(cè)可以放入-20℃(1-3個(gè)月)或-80℃(3-6個(gè)月)保存。

　　2.血漿：用EDTA，枸櫞酸鈉，肝素等作為抗凝劑，加入血液混勻后，1000-3000rpm離心10分鐘，取上清立即測(cè)試，暫時(shí)不測(cè)可以放入-20℃(1-3個(gè)月)或-80℃(3-6個(gè)月)保存。

　　3.組織勻漿：切取組織塊，0.01MPBS中過(guò)洗一次;按照1G組織加入5-10ml組織蛋白萃取試劑的比例，在冰水中勻漿。勻漿完成后，5000-10000rpm離心10分鐘，取上清立即測(cè)試，暫時(shí)不測(cè)可以放入-20℃(1-3個(gè)月)或-80℃(3-6個(gè)月)保存。

　　4.細(xì)胞培養(yǎng)上清：1000-3000rpm離心10分鐘，取上清立即測(cè)試，暫時(shí)不測(cè)可以放入-20℃(1-3個(gè)月)或-80℃(3-6個(gè)月)保存。

　　5.尿液，腹水，腦脊液等：1000-3000rpm離心10分鐘，取上清立即測(cè)試，暫時(shí)不測(cè)可以放入-20℃(1-3個(gè)月)或-80℃3-6個(gè)月)保存。

　　注：樣品稀釋的一般原則

　　用戶(hù)須查閱相關(guān)文獻(xiàn)了解標(biāo)本內(nèi)待測(cè)因子的含量，決定適當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù)，以使稀釋后樣品中待測(cè)因子的濃度處于ELISA試劑盒的檢測(cè)范圍。樣品的稀釋?xiě)?yīng)有詳細(xì)記錄。

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